【摘 要】
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[目的]探讨外源性化学致癌物黄曲霉毒素B1 (Aflatoxin B1,AFB1)短时间作用后对肝细胞基因表达水平的影响；考察损伤肝细胞分泌因子是否导致微环境恶性转化以及转化后的微环境对肿瘤成瘤和迁移能力的影响.[方法]用全骨髓贴壁法原代培养大鼠骨髓间充质干细胞(BMSCs),利用茜红素和油红染色检测成脂和成骨分化特性,流式细胞技术鉴定BMSCs细胞表面标记物.通过MTT试验评价AFB1对BRL细
【机 构】
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军事医学科学院卫生学环境医学研究所,天津300050 湖北省疾病预防控制中心,武汉430075
【出 处】
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中国毒理学会第七次全国毒理学大会暨第八届湖北科技论坛
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[目的]探讨外源性化学致癌物黄曲霉毒素B1 (Aflatoxin B1,AFB1)短时间作用后对肝细胞基因表达水平的影响；考察损伤肝细胞分泌因子是否导致微环境恶性转化以及转化后的微环境对肿瘤成瘤和迁移能力的影响.[方法]用全骨髓贴壁法原代培养大鼠骨髓间充质干细胞(BMSCs),利用茜红素和油红染色检测成脂和成骨分化特性,流式细胞技术鉴定BMSCs细胞表面标记物.通过MTT试验评价AFB1对BRL细胞存活率的影响,比较染毒前后细胞增殖能力的差异；利用染色体核型分析Giemsa显带技术检测AFB1对BRL细胞染色体的影响；通过实时荧光定量PCR技术(RT-PCR)检测AFB1对BRL细胞TGF-β基因和PDGF基因家族表达水平的影响.利用Transwell共培养模型,模拟体内微环境,探索损伤BRL细胞对BMSCs的影响.采用免疫组化技术检测诱导后BMSCs α-SMA表达水平的变化.利用软琼脂克隆形成试验、细胞划痕试验和细胞侵袭试验检测对HepG2成瘤能力、迁移能力和侵袭能力的影响.[结果]成功培养出BMSCs,细胞表面标记物CD29阳性,阳性率为92.5％； CD44阳性,阳性率为65％； CD45阴性、阳性率为3.5％.传代培养的细胞具有成骨和成脂分化特性.AFB1对BRL细胞影响研究结果表明,当AFB1剂量为3mmol/L时,BRL细胞存活率为43.59％,显著低于对照组(p＜0.05),IC50为2.96mmol/L.AFB1引起BRL细胞染色体出现断裂、缺失、畸变和多倍体等多种改变.AFB1染毒BRL细胞10h后,TGF-β、PDGF-A、PDGF-B、PDGF-C、PDGF-D mRNA表达水平显著升高,提示可能会引起周围间质的活化.AFB1染毒后的BRL细胞与BMSC建立Tranwell小室共培养后,检测到BMSC的α-SMA表达量上调；通过软琼脂克隆试验、划痕试验以及侵袭试验检测,诱导后BMSCs可显著增强HepG2的迁徙和侵袭能力.[结论]AFB1短期处理肝细胞引起非致瘤性损伤可导致间充质干细胞活化,具有潜在的增强肿瘤细胞成瘤、迁徙和侵袭能力.
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