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目的:在研究RSV感染后气道神经源性炎症和气道神经可塑性致气道高反应性的基础上,研究呼吸道合胞病毒(RSV)感染后大鼠脊髓背根神经节神经元转录因子的表达变化,筛选可能与气道神经可塑性相关的转录因子,为哮喘的防治探索一条新的途径.
方法:1-2周龄SD大鼠随机区组分为2组,每组30只.1组:空白对照组:2组:RSV感染组对照组(30只),用2%戊巴比妥钠40mg/kg腹腔注射麻醉大鼠,每一个鼻孔内滴入0.4ul/g无病毒培养基。②RSV感染组(30只),用2%戊巴比妥钠40mg/kg腹腔注射麻醉大鼠,在每一个鼻孔内滴入0.4ul/g滴度为5X104TCID50/0.1ML的RSV病毒悬液。以上操作每周重复一次。各组第8周将其中5只大鼠进行气道反应性测定,气道反应性测定后,取左肺,HE染色观察病理改变,行免疫组化染色检测,在冰面上迅速剖取脊髓背根神经节C7-T5于冻存管中,保存于液氮中。免疫组化检测气道、神经节SYN、NF的表达,用转录因子活性芯片初步筛选调控气道神经可塑性的信号转录子,western blot检测EGR-1在肺组织和脊髓背根节的表达变化。
结果:
(1)实验组大鼠吸入梯度浓度组胺后气道阻力明显高于正常对照组,差异有显著性(均P<0.05),说明存在气道高反应性。
(2)利用TranSignal蛋白/DNA组合芯片(345)检测筛选:RSV反复感染引起大鼠C7-T5背根节345个转录因子中的55个表达上调2倍以上,43个表达下调2倍以上。
(3)western blot检测EGR—1在肺部和脊髓背根节细胞的表达变化,结果显示EGR-1在RSV感染组表达明显低于对照。
结论:转录因子活性芯片初步筛选出了反复呼吸道合胞病毒感染后脊髓背根节神经元细胞内发生活性改变的转录因子98种,即刻早期反应基因-1(EGR-1)可能不是是其中最关键的转录因子,为进一步探索反复呼吸道合胞病毒感染后气道神经可塑性变化的关键转录因子提供了研究基础。