【摘 要】
：
为了检测新发现的猪MAR序列(Sus scrofa MAR,SusMAR)在转基因中的作用效果,我们以PiggyBac (PB)载体为骨架,构建了MAR在不同位置的三种重组载体：包括MAR在β-半乳糖苷酶(β-galactosidase,β-gal)表达单元两侧和一个MAR在其上游或下游位置.并以牛的MAR序列(Bos taurus MAR,BosMAR)为阳性对照,其插入位点与SusMAR一致.
论文部分内容阅读
为了检测新发现的猪MAR序列(Sus scrofa MAR,SusMAR)在转基因中的作用效果,我们以PiggyBac (PB)载体为骨架,构建了MAR在不同位置的三种重组载体：包括MAR在β-半乳糖苷酶(β-galactosidase,β-gal)表达单元两侧和一个MAR在其上游或下游位置.并以牛的MAR序列(Bos taurus MAR,BosMAR)为阳性对照,其插入位点与SusMAR一致.将这些重组载体与PB转座酶(PBase+组)或PB转座酶对照质粒(PBase control或PBase-组)共转染293T细胞.无抗生素筛选16天后,测定蛋白表达和LacZ基因拷贝数：PBase+组中,与对照组相比,含SusMAR或BosMAR载体组的蛋白表达量分别显著提高了(P＜0.001) 4.25-5.34倍和3.46-3.67倍.然而,PBase-组中,与对照组相比,仅有下游含有SuaMAR载体组和上游含有BosMAR载体组的蛋白表达量显著增加了(P＜0.05) 3-3.14倍.此外,PBase+组相比PBase-组的整体蛋白表达量提高11.19-26.09倍.与对照组相比,基因的拷贝数都没有显著的增加(P＞0.05).以上结果证实,新发现的SusMAR序列能增加重组基因在293T细胞中的表达水平,并且不增加转基因的拷贝数.本文为治疗性蛋白稳定和高水平的表达奠定了基础.
其他文献
由于缺乏优质牧草,常给奶牛饲喂高比例谷物精料以满足高产奶的需求,而导致亚急性瘤胃酸中毒(SARA)的发生.SARA时瘤胃和后段肠道内异常代谢产物增加,超出肠道脱毒能力而转移至血液,引起代谢性疾病.迄今,有关异常代谢产物移位的解剖位置尚无定论.与瘤胃相比,后段肠道更为易"漏".因此,我们以泌乳期奶山羊为模型,研究高比例谷物精料对后段肠道屏障功能和上皮细胞凋亡的影响.结果 表明,饲喂高比例谷物精料导致
用多能干细胞(PSC)通过体外诱导,获得雌性生殖细胞的研究已有报道,但是,其诱导时间较长(＞45天),效率较低.本研究利用人PSCs,通过两步诱导法,将PSCs定向分化为雌性生殖细胞.首先,将多能干细胞培养在添加了卵泡液和生长因子的生殖细胞培养液中进行第一步诱导.10天后,细胞分化成原始生殖细胞样形态,表达DAZL、SOX 17和BLIMP1等生殖细胞的标记.为进一步获得卵母样细胞,将诱导得到的原
胃癌的癌症死亡率位居世界第二,其中亚洲如中国、日本、韩国等国家都是胃癌的高发区。在中国,胃癌具有发病率和死亡率高、早期胃癌比例低、进展期病例为主要诊治对象等特点。胃癌发生后通常通过手术治疗,目前早期的诊断和治疗是降低死亡率的唯一途径。最新研究显示DNA甲基化转移酶家族与胃癌的发病机制之间存在着重要的关联,DNMT1、DNMT3a和DNMT3b在胃癌发生过程中在胃癌组织中都是高表达的,而DNMT2在
非酒精性脂肪性肝病(NAFLD)是一类无过量饮酒史,病理学特征表现为肝细胞脂肪变性和脂质贮积的临床综合征.近年来营养过多引起的NAFLD已经成为肝癌的一个重要诱因.CYP2A5是Ⅰ相酶,多种结构不相关因素诱导的肝损伤可引起CYP2A5表达升高而其他大多数Ⅰ相酶的表达降低.核转录因子Nrf2,是抗氧化应激反应的中枢调节因子,在多种因素诱导的肝损伤过程中发挥肝细胞保护作用.本研究旨在探讨NAFLD中C
细菌细胞形状是由其细胞壁决定的。细菌形状之所以不同，是因为参与细胞分裂以及细胞壁合成的机制有所差异。在诸多参与细胞分裂的蛋白中，青霉素结合蛋白(penicillin-binding proteins)在肽聚糖合成过程中显得有为重要。青霉素结合蛋白主要作用是催化肽聚糖的合成与组装。我们知道，目前的研究认为，在葡萄球状菌中，只有一种肽聚糖合成机制；在椭球形菌中，有两种；在球形菌中，尚不十分清楚。拿肺炎
杂合酶CTX-M-64、CTX-M-123和CTX-M-132的氨基酸序列两端与CTX-M-1群的序列匹配,中间与CTX-M-9群的序列匹配.分析编码这些杂合酶的基因及其所在质粒发现,它们可能是由全球最流行的ESBLs基因blaCTX-M-14和blaCTX-M-15经过重组形成.在活细胞体内的这些杂合酶对β-内酰胺类抗生素表现出了不同的抗性.为了更好地了解这些酶的底物特性和催化机制,我们对这些杂
本研究旨在观察健康牦牛胸腺的形态学及CD3ε、S100β和caspase-3表达量的增龄性变化,为进一步探讨胸腺生理或免疫功能提供形态学资料.选取三个年龄段：初生(1-7日龄)、发育期(5-7月龄)及成年(3-4岁)健康牦牛的胸腺样本,通过常规组织学及透射电镜观察不同年龄段牦牛胸腺组织结构变化；采用qRT-PCR、WB及免疫组织化学的方法检测CD3ε、S100β和caspase-3基因和蛋白表达量
[目的]microRNAs是一类小分子非编码RNA (18-24nt),通过在转录后水平进行基因表达调控,从而广泛参与众多的生物进程.对于动物而言,寒冷是一种最常见的环境影响因素.为了明确冷应激状态下大鼠microRNAs的表达规律及其作用,我们进行了如下实验.[方法]我们建立了2个大鼠血清小RNA库,然后对这些小RNA进行了深度测序以及生物信息分析.实验所用大鼠分别利用的是常温和低温(4℃,12
胚胎着床是妊娠建立的先决条件。胚胎着床后,胚胎周围的基质细胞增殖和分化成为蜕膜细胞。而细胞外基质(Extracellular matrix,ECM)的重构是蜕膜化的一个特征。赖氨酰氧化酶(Lysyl oxidase,Lox)是一种铜依赖性单胺氧化酶,能够促使ECM中的胶原蛋白和弹性蛋白发生交联。在早期妊娠中,Lox的作用还未被研究过。经研究发现,Lox特异表达于小鼠妊娠第五天胚泡周围基质细胞中,第
镍和镍化合物广泛存在于自然界中,常应用于化学工业,可通过自然或人为途径排放到环境中,对人类与动植物造成严重危害.本研究选用1日龄肉鸡健雏280只,随机分为4组,每组70只,分别饲喂对照日粮和添加300 mg/kg,600 mg/kg,900 mg/kg氯化镍(NiCl2)的日粮,试验周期42天.14、28和42日龄时每组随机抽取5只肉鸡,取出肾脏,应用组织病理学、免疫组化、TUNEL、流式细胞术、