【摘 要】
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为了检测新发现的猪MAR序列(Sus scrofa MAR,SusMAR)在转基因中的作用效果,我们以PiggyBac (PB)载体为骨架,构建了MAR在不同位置的三种重组载体:包括MAR在β-半乳糖苷酶(β-galactosidase,β-gal)表达单元两侧和一个MAR在其上游或下游位置.并以牛的MAR序列(Bos taurus MAR,BosMAR)为阳性对照,其插入位点与SusMAR一致.
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为了检测新发现的猪MAR序列(Sus scrofa MAR,SusMAR)在转基因中的作用效果,我们以PiggyBac (PB)载体为骨架,构建了MAR在不同位置的三种重组载体:包括MAR在β-半乳糖苷酶(β-galactosidase,β-gal)表达单元两侧和一个MAR在其上游或下游位置.并以牛的MAR序列(Bos taurus MAR,BosMAR)为阳性对照,其插入位点与SusMAR一致.将这些重组载体与PB转座酶(PBase+组)或PB转座酶对照质粒(PBase control或PBase-组)共转染293T细胞.无抗生素筛选16天后,测定蛋白表达和LacZ基因拷贝数:PBase+组中,与对照组相比,含SusMAR或BosMAR载体组的蛋白表达量分别显著提高了(P<0.001) 4.25-5.34倍和3.46-3.67倍.然而,PBase-组中,与对照组相比,仅有下游含有SuaMAR载体组和上游含有BosMAR载体组的蛋白表达量显著增加了(P<0.05) 3-3.14倍.此外,PBase+组相比PBase-组的整体蛋白表达量提高11.19-26.09倍.与对照组相比,基因的拷贝数都没有显著的增加(P>0.05).以上结果证实,新发现的SusMAR序列能增加重组基因在293T细胞中的表达水平,并且不增加转基因的拷贝数.本文为治疗性蛋白稳定和高水平的表达奠定了基础.
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