农杆菌介导小麦全蚀病菌转化体系的建立及突变体筛选

来源 :中国植物病理学会2012年学术年会 | 被引量 : 0次 | 上传用户:lindan1982
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  小麦全蚀病是由禾顶囊壳小麦变种(Gaeumanno,myces gramimsva vat.trttici)引起的严重为害小麦生产的一种根部病害.目前,对于小麦全蚀病的研究,多集中于病菌生物学特性、病害的发生发展规律、抗病育种以及寻找拮抗菌等方面,涉及病原菌遗传背景以及致病性的分子机理等方面的研究由于受到材料和方法的限制而开展很少.
其他文献
实验室前期鉴定了稻瘟菌中一个新的与致病性相关的APSES类转录因子Pcg2.酵母双杂交实验表明:Pcg2的C端与稻瘟菌中另一APSES类转录因子MoSwi6的C端存在相互作用.为了深入了解其在稻瘟菌中参与基因转录的分子机制,作者对Pcg2的C端561-715氨基酸进行了原核表达及纯化,并进行了晶体生长条件的筛选,以期获得其晶体并进行其三维结构的解析.
稻瘟菌中含有一个与人源通用转录辅因子PC4(positive cofactor 4)和酵母Sub1同源的蛋白MoSub1.为了深入地了解MoSub1在稻瘟菌中调控转录的分子机制,作者开展了重组MoSub1蛋白及其DNA复合物晶体结构解析的研究.首先,作者克隆了MoSub1的全长基因并将其在大肠杆菌中进行了表达,经过层析纯化,得到了可用于生长晶体纯度的重组MoSub1蛋白并解析了其晶体结构.
本实验室前期研究鉴定了一个新的同时具有转录激活和转录抑制功能的稻瘟菌转录因子Pcg2.为深入了解Peg2在稻瘟菌中参与基因表达调控转录的分子机制,作者对其转录激活区域和ANK domain (190-560AA)进行重组表达、纯化,为后续实验晶体生长及结构解析工作奠定基础.首先,PCR扩增编码目的蛋白的基因片段,双酶切连接表达载体pETM20,构建好表达载体 pETM20-Pcg2-M190-56
为了深入地了解稻瘟菌通用转录因子MoSub1在稻瘟菌中调控转录的分子机制,作者开展了MoSub1表达载体构建及重组MoSub1蛋白表达纯化工作,为后续实验其与核酸复合物制备、晶体生长及结构解析工作奠定基础。以稻瘟菌cDNA为模板,设计780F(5-CCATGGATATGACAAGTAAGAAACGCGC-3),780R(5-CTCGAGTCAGTCGGAACCAGAACCTTC-3)引物进行PCR
实验室前期研究鉴定了稻瘟菌一个新的剪切因子MoCon2,pull-down实验及酵母双杂实验证明:MoPrp19与MoCon2存在互作。稻瘟菌MoPrp19与酿酒酵母中的RNA剪切体成分Prp19及人源的Prp19蛋白具有高度同源性。为了阐释MoPrp19参与剪切反应的分子机制,作者开展了MoPrp19原核表达载体构建、诱导表达及蛋白纯化工作,为后续蛋白互作实验和晶体生长实验奠定基础。
甘蓝枯萎病是由尖孢镰刀菌(Fusarium oxysporum)引起的一种世界性分布的土传病害,该病原菌寄主范围广泛,可引起100多种植物的维管束萎蔫病害。发病后为害严重,蔓延迅速造成甘蓝萎蔫、枯死,并在甘蓝的全生育期均可发生,甘蓝平均年损失10%~30%,严重时可能绝产。目前对甘蓝枯萎病菌的研究多集中于传统的生物学特征,对致病机理的研究较为匮乏。
由于病原菌的潜伏侵染造成贮藏期间果蔬的大量腐烂已是生产中的突出问题.据统计,我国每年水果采后腐烂损失20%~30%.本研究从广西柑橘根际分离筛选获得一株柑橘采后病害的生防细菌菌株T132-6,该菌能有效抑制青霉病、绿霉病、蒂腐病等柑橘贮藏期病害的发生为害;利用该菌株发酵液对桠柑果实采收后进行防腐保鲜处理,常温贮藏4个月后好果率达85.6%,与阳性对照咪鲜胺的防腐保鲜效果相当.
双组分系统(two-component system,简称TCS)是细菌中普遍存在和非常保守的一种重要调节机制,调控许多重要生物功能,研究植物病原细菌的双组分信号转导系统对于进一步弄清其致病性调控机理、寻找药物防治靶标具有重要的意义。
酪蛋白激酶CK2是真核生物中高度保守的丝氨酸/苏氨酸蛋白激酶,在结构上是由2个催化亚基和2个调节亚基组成的四亚基复合体.稻瘟病菌(Magnaporthe oryzae)中CK2由3个基因编码,MGG 03696.6,MGG 00446.6,MGG 05651.6,根据酿酒酵母中的命名形式,我们将其命名为MoCKa,MoCKb1,MoCKb2.
RhoGTP酶作为一类重要的信号分子开关,调节许多细胞进程中涉及的细胞信号和细胞骨架动态如细胞极性、迁徙和囊泡运输等。小麦赤霉病既造成产量损失,更造成毒素污染,影响食品安全,引致小麦赤霉病的禾谷镰刀菌(Fusarium graminearum)基因组中有6个RhoGTP酶成员。