星星草耐盐基因的分离及测序分析

来源 :第十一届中国科协年会 | 被引量 : 0次 | 上传用户:qb54223322
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星星草(Puccinellia tenuiflora)抗旱、耐盐能力强,是进行耐盐碱机理研究的良好材料。本试验目的是对在盐碱胁迫条件下和非盐碱胁迫条件下星星草基因表达差异进行分析,得到耐盐相关基因。试验中的盐胁迫材料(作为tester)是于5月份返碱期在天然盐碱地(pH9.5)草场采集的星星革,非盐胁追材料(作为driver)是温室中生长在培养土(pH 5~6)条件下三个月的星星草。用上述两种村料制作成抑制差减文库。本试验将差减文库2次PCR产物连接至pGEM-T载体中,随后转化到JM 109感受态细胞,经蓝白斑筛选、培养后提取质粒DNA,应用测序试剂盒避行质粒DNA测序PCR反应,产物经过70[%]酒精纯化后在MegaBACE 500测序仪上涮序。得出的序列经软件去除冗余,与NCBI效据库中序列进行比对得到部分基因的预测功能。本试验共获得2195条200bp以上的序列(平均长度391bp,最长片段1012bp)。聚类后,得到非重复EST701个,通过上网比对,有561个序列与网络数据库中序列没有显著同源性,有140个序列与网络数据库中序列具有相似区域,其中功能未知的有32个,功能已知的有80个,这些基因的功能包括渗透调节,基因调控、活性氧清除、离子转运等,并由此确认星星草耐盐过程与这些基因的表达密切相关。
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