【摘 要】
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以AIV H9亚型油乳剂灭活疫苗作为免疫原,免疫8wk BALB/c小鼠.采用淋巴细胞杂交瘤技术制备抗AIV H9亚型血凝素蛋白的mAb;采用ELISA和血凝抑制试验(HI)检测腹水mAb的效价;采用ELISA、HI、免疫荧光染色(IF)及Western-blot鉴定mAb的特异性.获得3株可稳定分泌特异性mAb的杂交瘤细胞株2A3、2H1和1C8,其腹水mAb的效价依次为1×10、1×10和5×
【机 构】
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扬州大学生物科学与技术学院 扬州大学生物科学与技术学院;扬州大学农业部畜禽传染病学重点开放实验室(
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以AIV H9亚型油乳剂灭活疫苗作为免疫原,免疫8wk BALB/c小鼠.采用淋巴细胞杂交瘤技术制备抗AIV H9亚型血凝素蛋白的mAb;采用ELISA和血凝抑制试验(HI)检测腹水mAb的效价;采用ELISA、HI、免疫荧光染色(IF)及Western-blot鉴定mAb的特异性.获得3株可稳定分泌特异性mAb的杂交瘤细胞株2A3、2H1和1C8,其腹水mAb的效价依次为1×10<7>、1×10<5>和5×10<6>,血凝抑制效价为1×2<8>~1×2<13>;3株mAb的Ig亚类均为IgG<,1>.以2H1 mAb进行Western-blot的结果显示,该mAb能与AIV的75kd的蛋白条带起反应,表明其是针对AIV H9亚型血凝素蛋白的mAb.与32株AIV H9亚型国内分离株进行血凝抑制试验表明,2H1 mAb具有良好的广谱性.本文成功地制备了抗AIV H9亚型血凝素蛋白的mAb,为AIV的抗原性分析、血清学诊断、疫苗质量的监测及流行病学调查等奠定了基础.
其他文献
参试药剂配方在水稻抛后4天或7天施药,对水稻都很安全.并且均有较好的除稗效果,综合防效的好坏和除草增产率的高低均表现在防除扁秆藨草的效果差异上.各施药处理的增产主要表现在亩成穗的增加和穗粒数的提高.各药剂处理间比较:30﹪阿罗津60ml加10﹪太阳星6g,以及35.75﹪龙杀150g在水稻抛后4天或7天施药,除草效果较好,处理之间的差异也较小,而除草增产率,阿罗津加太阳星处理则以抛后4天施药较高,
根据禽流感病毒(AIV)编码核蛋白(NP)和编码血凝素(HA)基因序列,分别设计一对用来鉴定A型AIV特异性的引物(NP-F,NP-R),鉴定H和HAIV不同亚型的特异性引物(H-F,H-R;H-F,H-R),建立多重RT-PCR快速检测方法,可使每种病毒能同时扩增出两条带分别为:型(NP:330bp)和亚型(HA:550 bp,or HA:490bp).通过对105份样品进行检测,与血清学检测方
尼帕病毒病(Nipah Virus Disease,NVD)是最近发现的继英国疯牛病、台湾岛猪口蹄疫、香港禽流感后,又一引起世界各国广泛关注和恐慌的人、畜共患病.它严重危害猪和人类健康,是急性高度致死性传染病,发病率高,主要症状为神经症状神、震颤、惊厥和昏迷等,且进行性加重和呼吸道症状.从公共卫生的角度出发,本病应引起国内医学和畜牧兽医界人士的高度重视.本综述从病原学和流行学简单阐述该病的一些研究
用血凝(HA)和血凝抑制(HI)试验对南京市5家农贸市场50份鸡血清样品进行了新城疫(ND)、禽流感(H型)抗体测定,结果ND抗体小于2的有36份,占72﹪,大于2的有14份,占28﹪;禽流感H抗体小于2的有18份,占36﹪,大于2的有32份,占64﹪.检测结果表明所采5家农贸市场50份鸡只ND和AI H抗体水平均比较低,潜在着感染这两种疫病的可能,需加强市场监测和产地检疫,加强免疫,以减少这两种
采RT-PCR方法对两株O型口蹄疫病毒的VP1基因进行了扩增和序列测定,结果表明两毒株VP1基因均为639bp,编码213个氨基酸.序列比较显示两毒株具有较大的基因差异,分别属于Cathay和ME-SA拓扑型.进一步将两毒株VP1基因分别亚克隆到原核表达载体pET-Trx中,构建重组质粒pETVP14和pETVP116,转化大肠杆菌BL21(DE3),并用IPTG诱导.重组菌菌体裂解物SDS-PA
本试验以犬2型腺病毒全基因组重组质粒pPolyⅡ-CAV-2及其E3区重组质粒pVAX-E3为基础,通过Dra Ⅲ和Ssp Ⅰ双酶切,缺失25097bp-26141bp共1044bpE3区片段,按与编码链相同转录方向插入由CMV启动子、狂犬病病毒SRV9株糖蛋白基因、SV40 polyA构成的总长2424bp的表达盒,获得重组基因组质粒pPoly Ⅱ-CAV-2-CGS(34.7kb).以Asc
本试验以SspI酶切进行犬2型腺病毒全基因组E3区部分缺失,并插入由CMV启动子、狂犬病病毒SRV9株核蛋白、牛生长激素polyA构成的长2.4kb的表达盒.经AscI和PvuI双酶切游离重组全基因组,转染MDCK细胞,得到重组犬2型腺病毒.Western bloting检测表明,狂犬病病毒核蛋白在重组犬2型腺病毒中得到了表达.初步免疫试验显示,重组病毒可以诱导受试犬产生针对犬2型腺病毒和狂犬病病
基于目前FMD疫苗研究的现状及发展趋势,在详尽了解口蹄疫病毒(Foot-and-Mouth disease virus,FMDV)分子结构及其生物功能,分析病毒抑制宿主免疫应答的分子成分,及激活宿主免疫细胞产生保护性免疫应答(中和抗体和CTL)的分子基础上,本研究提出以O型和A型FMDV主要结构蛋白VP1基因为基础,以非结构蛋白3ABC及结构蛋白VP4上的Th2细胞表位为辅助基因,将以上三个基因串
表达P36基因的重组菌BL21(6P-1-P36)经诱导表达,超声波裂解后高速离心,分别收集上清和沉淀.可溶性表达产物亲和层析纯化后用于检测;同时,用GST-P36包涵体沉淀腹腔注射免疫BALB/c小鼠(400μg/只).利用淋巴细胞杂交瘤技术,获得了一株能分泌特异性抗体的单克隆细胞株5A7-2.生物学特性鉴定表明,腹水单抗的间接ELISA效价为1:2.5×10;免疫球蛋白亚类为IgG.免疫印迹结
免疫原基因的密码子优化是提高DNA疫苗免疫保护效果的有效策略.鸡与哺乳动物细胞在蛋白翻译过程中具有相同的密码子编嗜性,但与A型流感病毒保护性免疫原HA蛋白氨基酸密码子使用频率存在着明显差异.为此,利用寡核苷酸合成、重叠延伸PCR法及限制酶切法构建了密码子优化的A/Goose/GuangDong/1/96(H5N1)[GD/1/96(H5N1)]的HA基因(optiHA),并将其插入CMV启动子表达