【摘 要】
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为了建立一种方法定量检测禽呼肠孤病毒δNS和δC基因，针对禽呼肠孤病毒δNS、δC基因和管家基因β-actin分别设计了特异性引物，并将PCR扩增的的片段分别连接到pMD18-T载体上，构建的重组质粒分别命名为βactin-pMD18-T、δC-pMD18-T和8NS-pMD18-T。重组质粒经筛选、鉴定纯化后，梯度倍比稀释作为标准品，用于实时定量荧光PCR中禽呼肠孤病毒δNS、δC基因和看家基因
【机 构】
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广西大学 动物科技学院,广西 南宁 530005 广西兽医研究所,广西 南宁 530001
【出 处】
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中国畜牧兽医学会动物传染病学分会第十三次学术研讨会
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为了建立一种方法定量检测禽呼肠孤病毒δNS和δC基因，针对禽呼肠孤病毒δNS、δC基因和管家基因β-actin分别设计了特异性引物，并将PCR扩增的的片段分别连接到pMD18-T载体上，构建的重组质粒分别命名为βactin-pMD18-T、δC-pMD18-T和8NS-pMD18-T。重组质粒经筛选、鉴定纯化后，梯度倍比稀释作为标准品，用于实时定量荧光PCR中禽呼肠孤病毒δNS、δC基因和看家基因β-actin标准曲线的构建。结果表明，建立的方法在1×10(1)-1×10(7)copies/ul模板范围内具有良好的线性关系，相关系数均在0.99以上，至少可检测到10个copies的阳性标准品。该方法具有快速，敏感性高、特异性强和重复性好等特点，能够检测禽呼肠孤病毒δNS和δC基因的表达。
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