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目的:在口腔骨组织工程中,如何促进种子细胞向成骨方向分化对颌骨缺损修复的效果至关重要.磁性纳米材料独特的光、电和磁学性质使其在颌骨缺损的修复中具有特殊效应.因此,本研究提出了一种利用磁性纳米颗粒组装体与细胞相互作用从而调控细胞分化的设想,为磁性纳米颗粒与组织工程支架复合、构建功能性微纳米结构,以开发新一代组织工程支架奠定基础.
方法:创新性地使用静磁场将裸表面的磁性氧化铁纳米颗粒组装为条纹状的阵列结构并表征,研究不同强度静磁场(20mT, 40mT、80mT和120mT)对组装体结构和性能的影响。将原代小鼠骨髓细胞接种到组装体上共培养10天,以在培养皿、玻璃片和自然干燥的纳米材料上共培养的细胞为对照组,进行流式细胞、扫描电镜、共聚焦显微镜、定量PCR和western blot等检测,并对该有序结构对细胞作用的主要原理和机制通路进行了初步的研究和分析。
结果:不同强度磁场下组装的磁性纳米颗粒阵列的形貌差别不大,但磁学性质差异较大,高场强下组装的结构具有更强的颗粒间磁相互作用、结构更为稳定。组装体的条纹状结构为细胞提供了更为有利的黏附位点,细胞倾向于粘附其上,并且细胞骨架呈现出沿条纹方向延展的拉伸状态。细胞活性在各组的差异不明显,但在组装体上细胞ALP和OCN的表达量明显增加,并随组装场强的增强而增加。BMP2-RUNX2是其可能的作用通路之。普鲁士蓝染色和对乳铁蛋白的定量PCR检测表明聚集体形式的磁性纳米颗粒进入细胞较少。ALP染色在后两种组装体上明显增强;加热退磁处理后ALP染色在各组间无差异,说明确实存在剩磁作用;外加相同的强磁场以排除剩磁作用,发现培养皿组和玻璃片组的ALP染色明显增强,而纳米材料组都表现为散在的斑点状染色,可见各组装体的剩磁作用是不同的。
结论:磁性纳米组装体对细胞骨向分化具有促进作用,并且在一定范围内随组装场强的增加而增强。组装体对细胞的作用不是由于纳米材料进入细胞内产生的,而是剩磁通过表面/界面作用产生的。