Cav1.2基因沉默牙髓干细胞系的构建

来源 :第九次全国牙体牙髓病学学术会议 | 被引量 : 0次 | 上传用户:cyzmie
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  目的:构建Cav1.2基因沉默的牙髓干细胞.方法:构建Cav1.2沉默基因载体:pLVX-shRNA2质粒,对质粒进行酶切并PCR检测以及DNA测序验证,对质粒进行大抽,病毒包装及浓缩,培养牙髓干细胞,并用Cav1.2沉默基因慢病毒颗粒感染牙髓干细胞.应用流式细胞分析仪,实时定量PCR,细胞免疫荧光技术和Western blot对细胞染效率进行检测.结果:病毒颗粒转染48小时后,见293T细胞已经表达出绿色荧光蛋白,说明病毒已经合成,并开始翻译绿色荧光蛋白.病毒颗粒感染rDPSCs 72小时后,荧光显微镜下见rDPSCs有绿色荧光蛋白表达,说明干扰序列已经表达,流式细胞仪检测绿色荧光细胞阳性率达91%.实时定量PCR显示Cav1.2 mRNA表达量下降90%,与对照组相比具有显著性差异(P<0.05). WestemBlot和细胞免疫荧光结果显示rDPSCs中Cav1.2的蛋白表达量明显降低.结论:成功构建Cav1.2基因沉默的牙髓干细胞,并且具有较高的沉默效率.
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