基于荧光标记检测分析(R5Y5)n序列模体对核小体定位的调控

来源 :中国生物工程学会第六次全国会员代表大会暨第九届学术年会 | 被引量 : 0次 | 上传用户:winter2009
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核小体定位调控着基因表达,是表观遗传学研究中的重要组成部分.影响核小体定位的因素包括DNA序列内在特性及一些外在的因素,如染色质重塑、组蛋白修饰等.研究认为DNA序列特征被认为是影响核小体定位的关键因素之一,其中核小体定位较强的一些序列上存在TA10bp周期性以及DNA序列模体,而polyA则具有较强的核小体排斥作用.本论文基于Trifonov EN提出的核小体定位理论,基于影响核小体定位的DNA序列10bp 周期性和序列模体, 设计了6条具有对组蛋白亲和性不同的DNA序列,分别命名为 CS1-CS6;将其克隆到重组质粒中,在PCR扩增实验中,利用在引物中标记Cy3荧光信号分子,获得大量标记有Cy3荧光信号分子的目的序列;利用体外组装核小体的技术,将目的DNA序列重构为核小体;电泳后检测荧光信号,比较分析6条目的序列重构核小体的能力强弱。结果发现,CS1、CS2、CS3的核小体形成能力比较强, CS4、CS5和CS6形成核小体能力较弱。该实验结果与Trifonov EN所提出的核小体在该模体上的精确定位基本吻合。
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