【摘 要】
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目的在我们传统PERT方法的基础上建立荧光实时定量逆转录PCR(Real-time Quantitive Reverse Transcription Polymerase Chain Reaction)检测方法,使得检测灵敏度进一步增强。
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目的在我们传统PERT方法的基础上建立荧光实时定量逆转录PCR(Real-time Quantitive Reverse Transcription Polymerase Chain Reaction)检测方法,使得检测灵敏度进一步增强。方法以噬菌体MS2RNA为模板,应用标准AMV逆转录酶催化体外逆转录反应合成相应cDNA.实时荧光定量PCR法检测底物cDNA模板量,进而得出逆转录酶的相对活性。结果将AMV逆转录酶标准10倍倍比连续稀释后催化逆转录反应,实时荧光定量PCR分析所得的逆转录产物cDNA,得到标准荧光值曲线,从而间接推测样品中有无逆转录病毒污染。结论成功建立了基于实时荧光定量PCR检测逆转录酶活性的新型方法,为生物制品外来污染尤其是逆转录病毒的污染的检测提供了参考指标。
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