【摘 要】
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为深入研究猪源BVDV基因组各基因的功能及其致病机理等,本研究构建了猪源BVDV-2分离株SH-28全长cDNA感染性克隆并在MDBK细胞上成功拯救病毒.将SH-28全基因组共分成9个片
【机 构】
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上海市农业科学院畜牧兽医研究所,上海201106
【出 处】
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上海市畜牧兽医学会2015年学术年会
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为深入研究猪源BVDV基因组各基因的功能及其致病机理等,本研究构建了猪源BVDV-2分离株SH-28全长cDNA感染性克隆并在MDBK细胞上成功拯救病毒.将SH-28全基因组共分成9个片段,经适当的限制性内切酶分析和DNA片段连接策略将其全长cDNA克隆至低拷贝载体pACYC 184中,同时利用PCR技术在其基因组5端和3端分别引入T7启动子序列和单一Sbfl酶切位点序列,构建出全长cDNA质粒pASH28.质粒经SbfI线性化后,利用T7MEGAscript kit将其体外转录成基因组RNA,然后用Lipofectamine LTX and PlusTM Reagent将RNA转染MDBK细胞,连续传代培养直至第十代.间接免疫荧光检测和RT-PCR鉴定结果表明vASH病毒拯救成功且其遗传特性稳定,证实我们成功建立了猪源BVDV-2感染性克隆平台.比较vASH和亲本病毒SH-28的病毒滴度增长趋势,发现两者的病毒滴度增长趋势一致.本研究成功构建了猪源BVDV-2感染性克隆,为深入研究猪源BVDV提供了技术和平台.
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