TGEV-PEDV-PRV基因芯片探针的构建

来源 :中国畜牧兽医学会畜牧兽医生物技术学分会暨中国免疫学会兽医免疫分会第七次研讨会 | 被引量 : 0次 | 上传用户:jydliu
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将TGEV、PEDV、PRV接种PK15细胞观察细胞病变,将细胞反复冻融三次收获病毒,并对病毒增值纯化。根据GenBank中已发表各病毒基因序列设计特异性引物,以病毒RNA为模板,用RT-PCR方法扩增出TGEV-S、PEDV-M、PRV-VP6基因,相应的片段分别长410bp、501bp、432bp。将扩增的目的基因连接到pMD18-T载体上,经蓝白斑筛选出阳性克隆进行序列测定。用DNAStar工具将其与GenBank上标准代表毒株序列进行了比较。结果显示:通过RT-PCR扩增出TGEV-S、PEDV-M、PRV-VP6基因,所选基因特异性很强,通过序列分析,同源性分别高达96.1%、97.4%、85%,具有高度保守性,表明可以作为芯片探针应用到基因芯片的制备。
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