目的：本研究利用角膜组织不同细胞和组织的光学特性，采用双光子荧光成像技术和二次谐波成像技术，对真菌性角膜炎小鼠角膜进行了活体体内、非侵入、立体形态学观察，为深入了解真菌性角膜炎的病理变化打下基础.方法：C57BL/6N正常对照小鼠和真菌接种后24小鼠分别麻醉、固定后，暴露眼球，采用上述设置进行扫描，获取图像资料，利用Zeiss Zen 2010图像分析软件进行处理、分析.结果：1)正常小鼠通过瞳孔，可以检测到角膜、房水和晶体组织，得到了这些部位的组织结构和细胞形态学的三维图像资料.2)可以清楚地检测到真菌、角膜上皮细胞、角膜基质细胞、角膜基质内的胶原结构，上皮下神经和血管影像.3)角膜真菌感染后，角膜固有细胞和胶原组织被破坏，胶原结构紊乱，炎症细胞包围，真菌周围组织呈现鞘样、隧道样结构；创伤部位有角膜上皮细胞填充的填充现象，真菌周围有角膜基质的激惹现象以及真菌和炎症细胞的相互作用.结论：采用双光子激光扫描显微镜，利用荧光成像技术和二次谐波成像技术，不但可以清楚地对小鼠眼前节结构进行三维立体显示，还可以清晰显示病变部位的组织、甚至细胞的微细的立体结构.通过对真菌性角膜炎小鼠角膜进行活体体内形态观察，可以清晰显示真菌性角膜炎病理状态下真菌、角膜固有细胞、胶原以及炎症细胞相互作用的立体图像，该方法是一种新的、活体体内、非创伤成像方法，对动态研究眼前节的病理以及病理变化提供了一些有意义的资料.