【摘 要】
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H3N2和H1N1亚型SIV是目前引起我国猪流感主要病原。猪流感的流行毒株A/Swine/Guangdong/1/2003 (H3N2)(简称为SIV-166株)是华南农业大学禽病研究室分离鉴定的一株SIV,用该毒
【机 构】
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华南农业大学兽医学院; 中国兽医药品监察所;
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H3N2和H1N1亚型SIV是目前引起我国猪流感主要病原。猪流感的流行毒株A/Swine/Guangdong/1/2003 (H3N2)(简称为SIV-166株)是华南农业大学禽病研究室分离鉴定的一株SIV,用该毒株制备的油乳剂灭活疫苗在实验室试验中具有良好免疫原性,但是该毒株在鸡胚上滴度不是特别高,难以满足生产的要求。本研究拟利用反向遗传技术对该病毒进行改造,研制出高滴度猪流感基因工程疫苗候选株。将SIV-166株主要保护性抗原HA和NA基因cDNA分别克隆至自行构建的流感病毒反向遗传8质粒系统载体质粒pSM-B5中,构建出重组穿梭质粒pSMB-166HA和pSMB-166NA,用这两种质粒与含有人流感病毒疫苗株A/Puerto Rico/8/34(H1N1)(PR8株)内部基因(NP、M、NS、PB1、PB2、PA)cDNA的质粒混合后,共转染293T细胞。收获60h后的培养液接种11日龄SPF鸡胚,35℃孵育48h,收获尿囊液。通过血凝试验,血凝抑制试验、RT-PCR方法和序列测定对所获救病毒进行鉴定,并命名为166B-H3N2/PR8株。检测结果表明,该重组病毒对鸡胚没有致病力,HA效价达到10log2以上,将该重组毒在SPF鸡胚上连传5代,其HA效价始终保持稳定,HA和NA基因的序列也未发生改变,说明该重组毒具有良好的鸡胚适应性和稳定性,具有研制抗H3N2亚型猪流感疫苗的前景。
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