Ap2α腺病毒的构建及在大鼠骨髓间充质干细胞中的表达

来源 :国际发育与疾病高峰论坛暨第六届儿童保健高层论坛、重庆市儿科年会 | 被引量 : 0次 | 上传用户:adu198612
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  目的:构建转录因子AP2a (Activator Protein 2a)重组腺病毒,并感染大鼠骨髓间充质干细胞(Mesenchymal Stem Cells,MSCs)检测其表达,为深入研究AP2a转录活性对MSCs诱导成神经分化的作用奠定重要基础。方法:以大鼠cDNA为模板,体外PCR扩增获得目的基因,定向克隆至腺病毒穿梭质粒pAdTrace-TOX构建pAdtrace-AP2a,在在BJ5183细菌中与腺病毒骨架质粒pAd-Easy1同源重组获得重组腺病毒质粒pAd-AP2a,随后在HEK293细胞获得重组腺病毒,腺病毒感染大鼠MSCs,RT-PCR及western blot检测AP2a的表达情况。结果:PCR及双酶切可见1400bp左右的特异性条带,测序证实AP2a序列与GENEBANK报道一致,并正确克隆至腺病毒质粒中,腺病毒Ad-AP2a在H EK293细胞中包装可见云雾状扩增,感染MSCs可观察到60%以上RFP阳性细胞,RT-PCR及western Blot结果显示MSCs中AP2a的基础表达较低,而Ad-AP2a腺病毒感染后表达显著增高。结论:成功构建携带转录因子 AP2a的重组腺病毒,并能有效感染MSCs,增强AP2a基因和蛋白水平的表达。
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