目的:顺铂为广谱、高效的抗肿瘤药物,广泛应用于肺癌、肠癌、乳腺癌等实体肿瘤,目前化学治疗方案中含有铂类药物的联合用药方案约占80-85%。但是铂类药物产出的耐药性也严重影响了它的疗程,成为临床上亟待解决的问题之一。细胞内药物聚积减少是细胞耐药的主要机制之一,本实验通过建立HPLC方法检测肺腺癌细胞内顺铂浓度,从而研究肺腺癌对顺铂的耐药与细胞内顺铂浓度的关系,为通过UPLC-MS/MS方法检测肺腺癌细胞内顺铂浓度奠定基础。方法:应用四甲基偶氮唑蓝(MTT)测定A549/DDP细胞的耐药倍数,采用Diamonsil C18反相色谱(250 mm×4.6mm,5μm);SPD-10AuP(UV-VIS)紫外检测器;HW-2000数据处理系统;流动相为甲醇:水=80:20;检测波长为254 nm;流速为1.0 ml/min;检测波长为265 nm;柱温为25℃。应用氯化镍作为内标通过HPLC法测定细胞内顺铂的含量。结果:A549/DDP细胞的耐药倍数是A549细胞的5.8倍。顺铂浓度在0.1-2.0μg/mL范围内与顺铂和氯化镍峰面积之比呈良好的线性关系(R2=0.9997,n=5);回收率(n=5)大于96.6%;日内精密度的RSD值分别为:4.01%、6.21%和4.09%,日间精密度的RSD值分别为1.82%、8.77%和3.84%。通过以上条件测定耐药细胞A549/DDP内顺铂的浓度显著低于A549细胞。结论:本研究建立的方法简便、快捷、专属性强的HPLC法测定细胞内顺铂浓度的方法,可用于测定细胞内顺铂浓度及肿瘤细胞耐顺铂的研究,通过此方法可以进一步开展顺铂的耐药机制和药代动力学的研究。同时为进一步应用质谱技术检测细胞内药物浓度提供依据。