【摘 要】
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间充质干细胞(MSCs)在体外培养扩增过程中,由于细胞在体内所处的微环境被剥夺,其干性容易丢失.而细胞外基质(ECM)在干细胞所处的微环境中对维持细胞干性起到重要的作用.有研究表明BMSCs来源的ECM可以维持BMSCs的干性.本研究旨在证明该BMSCs来源的ECM是否也能维持体外扩增的小鼠脂肪干细胞(ASCs)的干性.将小鼠ASCs分别在ECM铺层培养瓶(ECM组)和未铺的普通培养瓶(Plast
【机 构】
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上海交通大学医学院附属第九人民医院整复外科 上海市组织工程重点实验室
【出 处】
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第十一届全国再生医学(干细胞与组织工程)学术研讨会暨第七届全国组织工程与再生医学大会
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间充质干细胞(MSCs)在体外培养扩增过程中,由于细胞在体内所处的微环境被剥夺,其干性容易丢失.而细胞外基质(ECM)在干细胞所处的微环境中对维持细胞干性起到重要的作用.有研究表明BMSCs来源的ECM可以维持BMSCs的干性.本研究旨在证明该BMSCs来源的ECM是否也能维持体外扩增的小鼠脂肪干细胞(ASCs)的干性.将小鼠ASCs分别在ECM铺层培养瓶(ECM组)和未铺的普通培养瓶(Plastic组)中培养至第2代和第4代,然后收集细胞进行检测.结果显示,随着不断传代,ECM组中的ASCs一一直呈现成纤维细胞样的长梭形细胞形态,而Plastic组中的细胞逐渐变得大而铺展；细胞传3代或5代后,当细胞在间充质干细胞培养液(MesenPRO RSTM Medium)中培养时,两组细胞显现出相似的细胞动力学特性.但是当细胞在含10％血清的DMEM培养液中培养时,第3代和第5代的ECM组细胞较Plastic组细胞显示出更强的增殖能力(p＜0.01).当细胞以低密度(500个/10-cm培养皿)培养时,ECM组细胞较Plastic组能形成更多且更大的克隆,且两组细胞形成克隆数有显著差异(p＜0.05)；另外,经诱导后的ECM组较Plastic组细胞呈现出更强的成脂、成骨以及成软骨能力.定量分析示ECM组油红O染色面积、茜素红染色面积和甲苯胺蓝染色面积较Plastic组明显更大(p＜0.05),定量PCR也显示ECM组细胞PPARγ、 aP2、C/EBP、Rux2、osteocalcin、Sox9、collagenⅡ和aggrecan等基因表达较Plastic组明显更高(p＜0.05).这些结果表明,人BMSCs来源的ECM能有助于维持培养小鼠ASCs的干性.
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