【摘 要】
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本文发展了一种筛选过程原位监测的适配体筛选(systematic evolution of ligands byexponential enrichment,SELEX)[1]新方法,我们选取乳铁蛋白(Lactoferrin)[2,3]作为靶蛋白,牛血清白蛋白(BSA)、α-乳白蛋白(α-Lactalbumin)、β-乳球蛋白(β-lactoglobulin)和酪蛋白(Casein)作为反向筛选阴
【机 构】
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南京大学 化学化工学院 生命分析国家重点实验室,江苏 南京,210023
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本文发展了一种筛选过程原位监测的适配体筛选(systematic evolution of ligands byexponential enrichment,SELEX)[1]新方法,我们选取乳铁蛋白(Lactoferrin)[2,3]作为靶蛋白,牛血清白蛋白(BSA)、α-乳白蛋白(α-Lactalbumin)、β-乳球蛋白(β-lactoglobulin)和酪蛋白(Casein)作为反向筛选阴性蛋白.本方法建立的基于蛋白质微阵列芯片(ProteinMicroarray)和微流控芯片(Microfluidic)的适配体筛选方法(PMM-SELEX)通过阵列扫描仪获取蛋白质微阵列荧光强度信号进行在线监测筛选文库与靶蛋白之间的相互作用.经七轮连续筛选后,我们获得了对于靶蛋白-乳铁蛋白(Lactoferrin)具有高特异性、高亲和性的五条(Lac-14,Lac-6a,Lac-9,Lac-5,Lac-3a)适配体序列.此外,本研究使用此筛选方法在完成三次重复筛选后均得到了以上五条适配体序列.通过表面等离子共振方法(SurfacePlasmon Resonance,SPR)拟合求得以上五条适配体序列其Kd 值均低至nmol/L.我们选取五条序列中的其中一条适 Lac-6a 采用荧光偏振(fluorescence polarization,FP)方法对乳铁蛋白的浓度进行了测定.测定结果所得线性范围为 0.78-50 μg/mL,检测限为 0.39 μg/mL.
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