重组大肠杆菌生产肝素酶的培养基优化及酶活快速监测新方法研究

来源 :第二届全国化学工程与生物化工年会 | 被引量 : 0次 | 上传用户:yykk110
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肝素酶Ⅰ是降解大分子肝素制备低分子量肝素(Low molecular weight heparin,LMWH)的重要生物催化剂。本研究采用大肠杆菌重组表达肝素酶Ⅰ的策略,成功地构建了由肝素酶Ⅰ(hepA)和麦芽糖结合蛋白(MBP)融合的表达体系(pMHS)。结果表明,MBP 的融合极大地提高了肝素酶Ⅰ的可溶性表达。以M9 培养基为基础进一步对培养基组成进行了优化,获得了酶活高达15928IU/L,比酶活为10.340IU/mg 总蛋白的培养结果。为实现适于酶生产及其应用过程控制和优化的酶活的快速监测技术,通过构建绿色荧光蛋白GFP与肝素酶I(hepA)融合表达体系(pGFP-hepA),研究了利用绿色荧光蛋白GFP 构建快速定量肝素酶活方法的可行性。结果表明,GFP 的融合也可以提高肝素酶I 的可溶性表达,其荧光量与肝素酶活之间具有良好的线性关系。
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