【摘 要】
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目的:建立一种体外共培养定向诱导骨髓间充质干细胞(bone marrow mesenchymal stem cells,BMMSCs)向气管软骨细胞分化的方法,为组织工程气管治疗新生儿气管狭窄提供可选择的种子细胞来源.方法:无菌环境取兔骨髓,经全骨髓贴壁筛选法分离培养BMMSCs至第2代(P2),流式细胞术鉴定P2BMMSCs表型;经酶消化法分离培养气管软骨细胞,甲苯胺蓝染色检测软骨细胞分泌的蛋白
【机 构】
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厂东省人民医院(广东省医学科学院)新生儿科 广东省人民医院(广东省医学科学院)广东省心血管病研究所
【出 处】
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中华医学会第十八次全国儿科学术会议
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目的:建立一种体外共培养定向诱导骨髓间充质干细胞(bone marrow mesenchymal stem cells,BMMSCs)向气管软骨细胞分化的方法,为组织工程气管治疗新生儿气管狭窄提供可选择的种子细胞来源.方法:无菌环境取兔骨髓,经全骨髓贴壁筛选法分离培养BMMSCs至第2代(P2),流式细胞术鉴定P2BMMSCs表型;经酶消化法分离培养气管软骨细胞,甲苯胺蓝染色检测软骨细胞分泌的蛋白聚糖(aggrecan,GAG);BMMSCs与气管软骨细胞通过Transwell系统共培养,倒置显微镜观察细胞形态,qRT-PCR检测诱导后BMMSCs分泌的Ⅱ型胶原(typell collagen,COL2A1)和GAG,甲苯胺蓝染色检测GAG.结果:P2 BMMSCs表面抗原CD44, CD45阳性率分别为99.11％,8.54％;气管软骨细胞甲苯胺蓝染色阳性;诱导后BMMSCs形态由长梭形变为三角形或不规则形，表达基因COL2A1和GAG，甲苯胺蓝染色阳性。结论:BMMSCs与气管软骨细胞共培养能被诱导向软骨细胞分化，并表达软骨细胞特征性的细胞外基质成分，可为新生儿气管狭窄的细胞移植提供选择的种子细胞来源。
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