【摘 要】
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目的：PARK7是本课题组通过蛋白质组学筛选出的一种高表达差异蛋白,为探讨沙眼衣原体(Chlamydia trachomatis,Ct)质粒蛋白pORF5上调宿主蛋白PARK7对细胞凋亡的影响,为阐明Ct致病机制提供实验依据.方法： 用肿瘤坏死因子(TNF-α,20ng/ml)和放线菌酮(CHX,2μg/ml)诱导pORF5基因稳定转染的HeLa细胞(pORF5-HeLa)和空质粒稳定转染的对照H
【出 处】
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第三届临床微生物学与感染病学国际论坛暨全国微生物与人体健康学术会议
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目的：PARK7是本课题组通过蛋白质组学筛选出的一种高表达差异蛋白,为探讨沙眼衣原体(Chlamydia trachomatis,Ct)质粒蛋白pORF5上调宿主蛋白PARK7对细胞凋亡的影响,为阐明Ct致病机制提供实验依据.方法： 用肿瘤坏死因子(TNF-α,20ng/ml)和放线菌酮(CHX,2μg/ml)诱导pORF5基因稳定转染的HeLa细胞(pORF5-HeLa)和空质粒稳定转染的对照HeLa细胞(vector-HeLa)凋亡6h,Hoechst33342染色检测两组细胞凋亡情况,实时定量PCR (qRT-PCR)和Western blot分别检测凋亡相关蛋白Bax、Caspase-3、Bcl-2的mRNA和蛋白表达水平；构建PARK7慢病毒干扰载体,包装病毒后,感染pORF5-HeLa细胞,建立稳定干扰PARK7表达的pORF5-HeLa细胞系及对照细胞系；TNF-α和CHX预处理细胞6h后,qRT-PCR,Westernblot检测Bax、Caspase-3和Bcl-2的mRNA和蛋白表达水平. 结果：TNF-α和CHX预处理细胞后,发现对照组GFP-HeLa细胞出现较多固缩,碎裂,亮蓝浓染核,而pORF5-HeLa多数细胞核染色呈均匀,弥散荧光,pORF5-HeLa细胞的凋亡率较对照组下降32.4％ (P＜0.05)；pORF5-HeLa细胞中Bax和Caspase-3的mRNA水平较对照组分别下降5.6倍(P＜0.01)和18.6倍(P＜0.01)；pORF5-HeLa细胞中Bax的蛋白水平较对照组下降78.2％ (P＜0.01),而Bcl-2较对照上升167.8％ (P＜0.01).PARK7基因沉默后,细胞凋亡率较对照组增加30.8％ (P＜0.05),Bax和Caspase-3的mRNA水平分别是对照组的187.8倍(P＜0.01)和3.6倍(P＜0.01)；Bax的蛋白水平较对照组升高387.5％ (P＜0.01),Bcl-2蛋白水平较对照组下降91.0％ (P＜0.01).结论：沙眼衣原体pORF5质粒蛋白通过上调宿主蛋白PARK7的表达抑制细胞凋亡.
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