【摘 要】
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目的 探讨长链非编码RNA (LncRNA) HOTAIR调控EMT和肿瘤干细胞(CSCs)特性获得在香烟烟雾抽提物(CSE)所致肺支气管上皮(HBE)细胞恶性转化中作用及其分子过程.方法 20 μg/mL CSE急性处理HBE细胞1、3、6、12和24 h,实时定量PCR(qRT-PCR)检测细胞LncRNA HOTAIR水平,Western blot检测细胞STAT3水平及磷酸化程度；观察通过
【机 构】
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南京医科大学公共卫生学院卫生毒理学系,现代毒理学教育部重点实验室,南京211166
【出 处】
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2016(第二届)毒性测试替代方法与转化毒理学(国际)学术研讨会暨有害结局路径(AOP)与风险评估培训会议
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目的 探讨长链非编码RNA (LncRNA) HOTAIR调控EMT和肿瘤干细胞(CSCs)特性获得在香烟烟雾抽提物(CSE)所致肺支气管上皮(HBE)细胞恶性转化中作用及其分子过程.方法 20 μg/mL CSE急性处理HBE细胞1、3、6、12和24 h,实时定量PCR(qRT-PCR)检测细胞LncRNA HOTAIR水平,Western blot检测细胞STAT3水平及磷酸化程度；观察通过siRNA技术关闭STAT3后对CSE所致细胞LncRNA HOTAIR水平的影响,并应用ChIP实验验证STAT3与HOTAIR启动子区的结合情况.20 μg/mL CSE慢性处理10、20、30和40代后,软琼脂集落形成实验,transwell实验和裸鼠皮下致瘤实验检测细胞恶性转化程度及其致瘤性；并应用免疫荧光实验、流式细胞分选及CSCs成球实验检测CSE慢性处理HBE细胞发生EMT、CSCs特性获得情况；观察通过siRNA下调LncRNA HOTAIR对CSE慢性处理致HBE细胞发生EMT、CSCs特性获得及恶性转化的影响.结果 20 μg/mL CSE急性处理HBE细胞6h时,细胞LncRNA HOTAIR水平明显升高,其在24 h达到高峰；20 μg/mL CSE慢性处理所致HBE细胞LncRNA HOTAIR表达水平随着代数的增加(恶性程度增加)而逐渐升高,具有一定时间-效应关系；siRNA下调STAT3可使CSE所致HBE细胞LncRNA HOTAIR水平回降,而且ChIP实验发现STAT3与LncRNA HOTAIR启动子区直接结合；应用IL-6中和抗体也可阻滞CSE所致HBE细胞p-STAT3和LncRNA HOTAIR水平升高；通过siRNA而下调HOTAIR水平后,CSE慢性处理所致恶性转化HBE细胞E-cadherin水平显著回升,N-cadherin和vimentin水平显著回降；而CD133和CD44 mRNA水平和Oct4、Bmi1蛋白水平明显回降,SP侧群细胞数明显降低；软琼脂上形成细胞集落数明显降低,侵袭转移能力及成瘤能力都明显下降.结论 CSE通过激活STAT3而引起LncRNA HOTAIR水平升高并导致EMT和CSCs特性获得,从而使HBE细胞发生恶性转化,因此LncRNA HOTAIR可能成为吸烟所致肺癌的有效生物标志之一,其具有潜在的应用价值.
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