【摘 要】
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目的：有研究提示尘肺病的发生发展过程与机体免疫功能的变化密切相关,本研究拟构建人源性煤工尘肺噬菌体单链抗体库,从中筛选煤工尘肺特异性单链抗体(single chain variable fragment, scFv),并采用职业流行病学调查进行初步验证,寻找体内是否存在煤工尘肺抗体生物标志,为筛选煤工尘肺诊断和治疗生物标志提供依据.方法：利用煤工尘肺患者外周血,构建人源性煤工尘肺噬菌体单链抗体库,
【机 构】
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郑州大学公共卫生学院劳动卫生学教研室 450001;新乡医学院公共卫生学院劳动卫生学与环境卫生学教研室 453003
【出 处】
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第六届中国毒理学会免疫毒理专业委员会换届及学术会议
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目的：有研究提示尘肺病的发生发展过程与机体免疫功能的变化密切相关,本研究拟构建人源性煤工尘肺噬菌体单链抗体库,从中筛选煤工尘肺特异性单链抗体(single chain variable fragment, scFv),并采用职业流行病学调查进行初步验证,寻找体内是否存在煤工尘肺抗体生物标志,为筛选煤工尘肺诊断和治疗生物标志提供依据.方法：利用煤工尘肺患者外周血,构建人源性煤工尘肺噬菌体单链抗体库,采用煤工尘肺和对照组的肺灌洗液进行4轮富集筛选,并测定库容量.每轮富集筛选时随机挑取20个单菌落,分别制备成scFv.将制备好的scFv包被到酶标板上,Elisa检测煤工尘肺患者(P)和对照者(N)肺灌洗液OD450值,以P/N＞2.0为阳性克隆,P/N＞3.0为强阳性克隆.提取强阳性克隆质粒DNA,进行PCR扩增和双酶切验证是否插入scFv基因.并对强阳性克隆进行测序判定,选择867例男性在岗接尘工人作为接尘组(558例煤工尘肺和309位接尘作业者)和393例男性岗前体检者作为对照组,Elisa法检测血浆中筛选出的强阳性克隆抗体浓度.结果：随着富集筛选次数的增加,煤工尘肺噬菌体抗体库的产出量逐渐增多,从8.9×103 pfu增加到5.5×106 pfu,并且投入产出比从1.46×10-6上升到6.40×10-4,富集倍数增加了438.36倍,说明煤工尘肺噬菌体抗体得到了有效的富集.比对鉴定6个强阳性克隆分别为血管内皮生长因子(vascular endothelial growth factor,VEGF)、白介素-18 (interleukin-18,IL-18)、热休克蛋白-70.1 (heat shock protein-70.1,HSP70.1)、人表皮生长因子受体3(human epidermal growth factor receptor3,HER3)、颗粒酶B(Granzyme B,Gz-B)和类风湿因子(rheumatoid factor, RF) scFv.Logistics回归分析在调整影响因素后得到VEGF (OR (95％ CI),0.02 (0.01-0.07), P＜0.05), RF-Ab (OR (95％ CI)： 0.46 (0.28-0.73), P＜0.05)和HSP70/HSP-70-Ab (OR (95％ CI)： 0.71 (0.53-0.95),P＜0.05)是煤工尘肺保护因素(表1-3).结论：从已构建的人源性煤工尘肺噬菌体抗体库筛选出6种煤工尘肺相关抗体,并且实现了可溶性表达.血清中VEGF, RF-Ab和HSP-70/HSP-70 AB是煤工尘肺诊断和治疗的潜在生物标志.
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