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目的:探讨自噬对SDF-1α介导牙髓干细胞迁移及牙髓再生的调控效应.方法:有限稀释法原代培养并鉴定人牙髓干细胞(DPSCs).CCK8、划痕和Transwell试验,检测SDF-1α对DPSC细胞活力和迁移的影响;细胞免疫荧光Western blot及透射电镜检测SDF-1α刺激下DPSCs细胞骨架、黏着斑蛋白及自噬表达水平的改变.并应用抑制试验探讨自噬对SDF-1α介导DPSC迁移的调控效应.冷冻干燥法制取多孔丝素蛋白支架并负载SDF-1α,利用牙根段/丝素蛋白支架复合体裸鼠皮下移植建立异位牙髓再生模型.HE、Masson三色法、苦味酸-天狼星红染色、Western blot、免疫组织化学及透射电镜对再生组织进行组织学及自噬相关分子表达分析.进一步选取比格犬根尖孔闭合恒牙,移植入负载SDF-1α的丝素蛋白支架,建立成熟恒牙原位牙髓再生模型,并对再生组织进行组织学分析.结果:SDF-1α可剂量依赖性促进DPSCs迁移,伴随细胞骨架改建以及黏着斑组装(Vincullin,p-Paxillin,p-FAK).同时,SDF-1α可激活DPSCs自噬相关蛋白(Beclin1,LC3,Atg5-Atg12复合体)表达及自噬小体的形成.并且自噬抑制剂(3-MA,氯喹)可不同程度阻断SDF-1α激发的DPSCs迁移;自噬激活剂(Rapamycin)则使DPSCs迁移水平进一步提升.丝素蛋白支架孔径约为200±46 μm,负载SDF-1α后并未改变支架的分子构象.DPSCs在上述支架可表现良好的铺展形态、增殖并伴随细胞外基质的分泌.牙根段-负载SDF-1α的丝素蛋白支架复合体整合人牙髓干细胞在裸鼠皮下可形成牙髓样组织,表现为富含血管和类似正常牙髓的新生胶原纤维形成,且牙本质壁沉积有DSP表达阳性的新生矿化组织.值得注意的是,再生组织中存在自噬及相关蛋白表达和自噬小体的形成.此外,LC3和血管内皮标记分子CD31呈现部分共定位的特征,提示自噬可能参与了异位再生牙髓组织的成血管过程.此外,再生牙髓样组织由供体细胞和宿主细胞共同组成.比格犬原位实验中,血凝块对照组再生组织中主要为沿牙本质壁形成的较厚的牙骨质样组织,髓腔内有大小不一的骨样组织及少量含有小血管的结缔组织;负载SDF-1α的丝素蛋白支架组再生组织表现为血运较丰富的结缔组织,胶原纤维排列方式与正常牙髓类似,髓腔内未见骨样组织,沿牙本质壁形成较薄的矿化组织.此外,在再生组织中,Atg5和LC3的表达均有升高,提示自噬存在于原位牙髓再生过程.结论:自噬可正向调控SDF-1α介导的DPSCs迁移.丝素蛋白支架负载SDF-1α可有效实现异位及原位牙髓再生,自噬可能通过参与介导DPSC迁移或自体干细胞募集参与牙髓再生的过程.本研究将为牙髓再生的临床转化提供依据.