【摘 要】
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[目的]使用雷帕霉素保护神经元机械损伤模型中的线粒体从而降低神经保护元的损伤.[方法]原代培养胎鼠脊髓神经元细胞，建立神经元机械损伤模型，实验分为正常神经元组、神经元损伤组、神经元损伤+雷帕霉素组.MTT法检测检测脊髓神经元的细胞存活率；WesternBlot检测自噬相关蛋白LC3Ⅱ/LC3Ⅰ和Beclin-1蛋白水平的表达水平；构建pcDNA-3.1(+)-GFP-LC3重组质粒，慢病毒转染
【出 处】
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中华医学会第十七届骨科学术会议暨第十届COA国际学术大会
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[目的]使用雷帕霉素保护神经元机械损伤模型中的线粒体从而降低神经保护元的损伤.[方法]原代培养胎鼠脊髓神经元细胞，建立神经元机械损伤模型，实验分为正常神经元组、神经元损伤组、神经元损伤+雷帕霉素组.MTT法检测检测脊髓神经元的细胞存活率；WesternBlot检测自噬相关蛋白LC3Ⅱ/LC3Ⅰ和Beclin-1蛋白水平的表达水平；构建pcDNA-3.1(+)-GFP-LC3重组质粒，慢病毒转染，采用显微镜观察荧光斑点评估自噬情况；JC-1荧光探针检测线粒体膜极性变化、DCFH—DA探针检测ROS评价自噬对细胞内活性氧(ROS)的清除作用.[结果]细胞存活率：损伤组细胞存活率明显低于正常组，雷帕霉素组的细胞存活率明显高于损伤对照组(p<0.05)；WesternBlot：正常组LC3Ⅱ/Ⅰ比值和Beclin-1明显低于损伤各组(p<0.05)；雷帕霉素组LC3Ⅱ/Ⅰ比值和Beclin-1明显高于损伤组(p<0.05)；GFP-LC3：正常组细胞内见绿色荧光均匀分布，损伤组细胞内可见绿色荧光斑点聚集；雷帕霉素组细胞内绿色荧光斑点数量明显高于损伤对照组(p<0.05)；JC-1荧光染色：损伤组能明显看到细胞分布强烈的绿色荧光，说明线粒体的膜电位下降，损伤模型建立成功.而雷帕霉素实验组及正常神经元组均有红色荧光，使得整个视野呈黄色.由此可见，雷帕霉素通过加强自噬作用对线粒体的形态维持、膜离子通透性和线粒体膜电位维护均有很强的作用.DCFH—DA探针检测ROS：雷帕霉素组绿色荧光强度较损伤组显著降低(p<0.05).[结论]雷帕霉素能诱导机械损伤神经元细胞自噬，并能维持线粒体的正常形态、降低线粒体膜电位的变化、降低细胞ROS水平.此外，雷帕霉素在机械损伤模型中对神经元有显著保护作用.我们得出结论：雷帕霉素能通过诱导细胞自噬作用于线粒体从而保护机械损伤模型中的神经元细胞，因此，加强对线粒体的保护是一种治疗急性脊髓损伤的的新思路.雷帕霉素；急性脊髓损伤；细胞自噬；线粒体损伤.
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