【摘 要】
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目的：狂犬病目前仍在世界范围内广泛流行,每年因狂犬病死亡的人数在59,000 以上,大部分集中在亚洲和非洲的发展中国家,95％以上是由犬传播的.目前兽用的狂犬疫苗主要为灭活疫苗,虽然其安全性高,但是免疫原性低,需要多次免疫才能提供有效保护,导致价格昂贵,阻碍了在发展中国家的广泛使用,迫切需要开发安全、高效、持久、低廉、能够口服的新型兽用疫苗.方法：本试验我们通过使用狂犬病街毒株DRV-SX-09
【机 构】
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华中农业大学 农业微生物国家重点实验室/动物医学院,湖北省 武汉430070
【出 处】
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第十七届中南地区实验动物科技交流会
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目的：狂犬病目前仍在世界范围内广泛流行,每年因狂犬病死亡的人数在59,000 以上,大部分集中在亚洲和非洲的发展中国家,95％以上是由犬传播的.目前兽用的狂犬疫苗主要为灭活疫苗,虽然其安全性高,但是免疫原性低,需要多次免疫才能提供有效保护,导致价格昂贵,阻碍了在发展中国家的广泛使用,迫切需要开发安全、高效、持久、低廉、能够口服的新型兽用疫苗.方法：本试验我们通过使用狂犬病街毒株DRV-SX-09 肌肉注射接种6 月龄的比格犬,建立狂犬病感染模型.同时,我们通过反向遗传技术,将犬的粒细胞-巨噬细胞集落刺激因子GM-CSF 克隆到LBNSE 狂犬病疫苗株中,获得重组狂犬病毒LBNSE-dGM-CSF.将该重组病毒通过口服免疫比格犬,检监测颈部淋巴结和血液中的免疫细胞及中和抗体水平变化,最有进行攻毒保护试验.结果：比格犬接种DRV-SX-09 后10 天左右出现临床症状,表现为恐水、麻痹、咽肌痉挛等症状,而对照组比格犬则表现正常.发病犬的脑部病理切片结果显示部分神经细胞出现水肿及脑实质出血,唾液腺和海马中分布着大量的病毒,小脑和大脑皮层中也存在一定病毒分布.将重组狂犬病毒LBNSE-dGM-CSF 和母本毒株LBNSE 对比格犬进行口服免疫,免疫3 天后发现重组狂犬病毒LBNSE-dGM-CSF 组外周血中的树突状细胞和B 细胞数量比母本株LBNSE 组显著上升.免疫重组病毒LBNSE-dGM-CSF 组的中和抗体在免疫后第2 周100％超过0.5 IU/ml,并在第4 周达到最大值.而免疫母本毒株组的6 只犬中只有2 只在免疫后2 周抗体水平大于0.5 IU/ml.口服免疫后第5 周,在犬的咬肌和颞肌肌肉注射野毒株DRV-SX-09,对照组全部发病死亡,而免疫组全部有效保护.结论：本实验成功的建立了狂犬病街毒DRV-SX-09 感染犬的动物模型,并构建了表达犬GM-CSF 的重组狂犬病毒LBNSE-dGM-CSF,口服免疫实验表明该病毒株是一株有效的犬用狂犬病疫苗.
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