[目的]应用RNA干扰技术设计构建针对猪肌醇磷酸酶SKIP的小干扰RNA,并观察转染猪肾IBRS-2细胞株后的干扰效果。 [方法]利用人类SKIP基因序列和猪的EST数据库设计引物克隆猪SKIP基因编码区序列,针对其设计有短发夹结构的3条mRNA序列,经退火成互补双链,克隆到载体中构建3个重组质粒,脂质体法转染质粒至IBRS-2细胞株后,半定量PCR检测SKIP mRNA的水平变化;细胞计数法绘制细胞生长柱状图。 [结果]单酶切和测序结果证明SKIP-小干扰RNA真核表达载体构建成功,其转染后的IBRS-2细胞SKIP基因表达水平均明显受到抑制,且在添加了胰岛素的培养基中细胞生长速度均明显高于阴性、空白对照组。 [结论]猪肌醇磷酸酶SKIP靶向RNA干扰重组质粒构建成功,该载体能有效抑制猪肾IBRS-2细胞株SKIP基因表达,并能促进胰岛素信号介导的细胞增殖。