目的：新生隐球菌是临床最常见的侵袭性病原真菌之一，可附着于活体植入材料表面形成生物膜结构，从而显著增强其对抗真菌药物的耐药性。本研究筛选鉴定了新生隐球菌生物膜态的3个外分泌差异蛋白，并初步论证其对隐球菌生物膜形成及毒力的功能影响。方法：应用ITRAQ差异蛋白分析技术筛选鉴定新生隐球菌在生物膜状态和游离状态外分泌蛋白的表达差异；利用同源重组方法构建各差异蛋白的基因缺失株，结合表型检测及细胞动物实验探索其对隐球菌生长与毒力的功能机制。结果：发现Vid、Gef、Omt等三个外分泌蛋白在隐球菌生物膜态表达显著上调；获得三个差异蛋白的基因敲除株，体外生物膜检测发现较之标准株，仅vid△表现为显著的生物膜缺失，同时其在巨噬细胞内的生存率及对小鼠吸入感染模型的毒力显著减弱。结论：我们的研究首次证实外分泌蛋白Vid对隐球菌的生物膜形成以及致病感染具有重要的调节功能，但具体分子机制仍有待于进一步探索。