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目的：构建肠道病毒71型(enterovirus71,EV71)AH3株的全基因序列克隆.方法：通过分段扩增和酶切连接将EV71全基因组cDNA片段逐步克隆入PWSK29载体,构建病毒基因组全序列的质粒.转染Vero细胞后,获得拯救病毒.经RT-PCR、酶切、测序、间接免疫荧光(IFA)等方法进行鉴定.结果：酶切鉴定结果与预期一致,序列分析显示为EV71基因；其转染Vero细胞后,可观察到典型的细胞病变；所获得的拯救子代病毒滴度(TCID50)为10-7.5；IFA检测可见感染细胞出现绿色荧光.