【摘 要】
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核酸适配体(Aptamer)是通过数富集配体系统进化技术(SELEX)从随机寡核苷酸文酸库中筛选获得的,对靶标具有高亲和力特异性结合的寡核苷酸序列,被誉为"化学抗体"[1].毛细管电泳(CE)也是在自由溶液中分离靶标-核酸复合物,它是快速、高效筛选核酸适配体的方法之一,通常只需要1～4 轮筛选就可获得蛋白质的适配体[1,2,3].本研究基于CE-SELEX 方法,首先表征靶蛋白性质并评价其与核酸库
【机 构】
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北京理工大学生命学院,“分子医学与生物诊疗”工业和信息化部重点实验室,北京 100081
【出 处】
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中国化学会第十二届全国微全分析系统学术会议、第七届全国微纳尺度生物分离分析学术会议、第七届国际微流控学学术论坛
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核酸适配体(Aptamer)是通过数富集配体系统进化技术(SELEX)从随机寡核苷酸文酸库中筛选获得的,对靶标具有高亲和力特异性结合的寡核苷酸序列,被誉为"化学抗体"[1].毛细管电泳(CE)也是在自由溶液中分离靶标-核酸复合物,它是快速、高效筛选核酸适配体的方法之一,通常只需要1～4 轮筛选就可获得蛋白质的适配体[1,2,3].本研究基于CE-SELEX 方法,首先表征靶蛋白性质并评价其与核酸库的亲和力,确定筛选策略后将筛选条件优化为孵育缓冲液10mM Na2HPO4-KH2PO4(pH 7.17),0.05 mM Mg2+,孵育温度37℃,孵育时间25min,经3 轮筛选后进行高通量测序,获得10 条适配体候选序列,测得KD 在低微摩尔级.进一步将适配体用于固相萃取柱的制备,用于Ig G Fc 片段的分离及纯化.
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