【摘 要】
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蜕皮抑制激素是甲壳动物CHH家族神经肽的主要成员之一,能抑制Y-器官蜕皮激素的合成.以中国明对虾(Fenneropenaeuschinensis)眼柄总RNA为模板,根据中国明对虾MIH的全长cDNA序
【机 构】
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中国科学院海洋研究所实验海洋生物学重点实验室青岛,266071
【出 处】
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国家“863”计划资源环境技术领域第三届海洋生物高技术论坛
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蜕皮抑制激素是甲壳动物CHH家族神经肽的主要成员之一,能抑制Y-器官蜕皮激素的合成.以中国明对虾(Fenneropenaeuschinensis)眼柄总RNA为模板,根据中国明对虾MIH的全长cDNA序列设计引物克隆了其成熟肽cDNA片段.将PCR扩增得到的MIH基因片断插入表达载体pCR(R)T7/NTTOPO(R)TA,然后转入E.coliBL21(DE3)p埘sS中,经IPTG诱导表达获得了重组蛋白,该重组蛋白以包涵体的形式存在于菌体蛋白中.尿素-SDS-PAGE分析表明,经1mmol/L的IPTG诱导4h,大量的重组蛋白获得了表达,在分子量13kDa处有一条与预测大小一致的特异性蛋白条带;经金属螯合柱纯化后,得到了单一的目的蛋白条带.Westernblotting检测结果表明:重组表达的蛋白与兔抗刀额新对虾MIH的多克隆抗体特异结合,证实该表达蛋白为中国明对虾MIH.通过胶内酶切与LC-ESI-MS证实重组蛋白的部分肽段与日本对虾MIH一致.MIH融合蛋白的成功表达为进一步深入研究其在中国明对虾蜕皮过程中的分子作用机制奠定了基础.
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