反义血管内皮细胞生长因子165基因治疗皮肤恶性黑色素瘤的实验研究

来源 :中国修复重建外科杂志 | 被引量 : 0次 | 上传用户:Fzz
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目的研究腺病毒介导的反义血管内皮细胞生长因子165(Adenovirus-mediatedaversevascularendothelialgrowthfactor165,Ad-aVEGF165)基因转染对恶性黑色素瘤体内外生长的影响。方法选用感染复数为100的腺病毒介导的绿色荧光蛋白(Adenovirus-mediatedgreenfluorescentprotein,Ad-GFP)和Ad-aVEGF165转染人血管内皮细胞株304(endotheliumcellofvessel304,ECV304)和人恶性黑色素细胞(A375)。ECV304细胞分为3组:A375母系组、Ad-GFP组和Ad-aVEGF165组。A375细胞分为3组:1640组、Ad-GFP组和Ad-aVEGF165组。测定其生长曲线、细胞周期和VEGF基因的表达。于裸鼠皮下接种A375细胞,待成瘤后进行转种和治疗,根据瘤体内注射物的不同随机分为PBS组、Ad-GFP组和Ad-aVEGF165组,每组5只;治疗结束后行大体观察、HE染色观察和微血管密度(micro-vasculardensity,MVD)检测。结果A375母系组和Ad-GFP组上清液均能刺激ECV304细胞的生长,Ad-aVEGF165组上清液能抑制ECV304细胞的生长。A375细胞中3组细胞均呈增殖趋势,各时间点的增殖速度比较无统计学意义(P>0.05)。ECV304细胞Ad-aVEGF165组增殖指数降低(P<0.05),A375细胞3组细胞增殖指数比较无统计学意义(P>0.05)。A375细胞1640组、Ad-GFP组和Ad-aVEGF165组平均灰度值分别为234.41±13.80、222.73±3.67和180.84±6.34。转种后2周Ad-aVEGF165组裸鼠体内肿瘤体积比Ad-GFP组和PBS组明显减小,并随时间延长越来越明显。HE染色Ad-aVEGF165组有凝固性坏死。PBS组、Ad-GFP组、Ad-aVEGF165组的MVD值分别为65±10、52±11和30±6个/视野。结论在体外,Ad-VEGF165通过抑制A375细胞VEGF基因的表达,进而抑制ECV304细胞的生长。在体内,Ad-aVEGF165阻断肿瘤血管的生成,进而抑制人恶性黑色素瘤的生长。
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