小反刍兽疫病毒Nigeria75/1毒株N基因重组杆状病毒的构建及ELISA抗体检测方法的建立

来源 :第四届全国免疫诊断暨疫苗学术研讨会 | 被引量 : 0次 | 上传用户:woniu5566
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本研究利用Bac-to-Bac杆状病毒表达系统,构建小反刍兽疫病毒(PPRV)N基因的重组杆状病毒。构建含有PPRV N基因的转移载体pFastHTA-N,转化DH10Bac感受态菌。利用其含有的细菌Tn7转座系统,将该基因重组至杆状病毒穿梭质粒bacmid中,转染昆虫细胞Sf21,获得含有PPRV N基因的重组杆状病毒。PcR鉴定含PPRV N基因的重组杆状病毒构建成功,感染昆虫细胞后,SDS-PAGE鉴定出60 ku左右的蛋白表达。Western blotting检测出该蛋白具有很好的抗原性。利用杆状病毒表达系统,成功地构建了含PPRV N基因的重组杆状病毒,以重组PPRV N蛋白做抗原,建立ELISA方法检测羊血清中的PPRV N蛋白的抗体情况。
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