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根据文献设计2对引物，PCR扩增FPV复制非必需区中外源基因插入位点两侧翼的片段，分别克隆到pUC19和DSK质粒中，并命名为pFP1和pFP2根据文献设计引物，PCR扩增鸡传染性喉气管炎病毒(ILTV)的GB基因的编码区。将GB基因克隆到质粒pFP1中获得重组质粒pFP1-GB；用酶切质粒pEGFP，得到GFP片段并克隆到质粒pFP2中,得到重组质粒pFP2-GFP。双酶切pFP1-GB得到FP1-GB片段，并克隆到质粒pFP2-GFP中，得到重组质粒pFP1GB-FP2GPF。酶切质粒pE/L-7.5，获得背向连接的2个鸡痘病毒启动子片段——PE/L-7.5，并将该片段克隆到重组质粒pFP1GB-FP2GPF获得重组质粒pGB-GFP，该质粒即为鸡痘病毒的转移质粒。在质粒pGB-GFP中，2个背向连接的启动子被克隆到的GB和GFP基因之间，分别启动GB和GFP基因的表达。经酶切和测序鉴定pGB-GFP，启动子PE/L和P7.5已分别正确地插入到GB和GFP基因之间，分别启动外源表达基因GB和筛选标记基因GFP的表达，从而证明已获得表达鸡传染性喉气管炎病毒GB基因重组鸡痘病毒转移载体DGB-GFP。该载体为下一步获得表达鸡传染性喉气管炎病毒GB基因的重组鸡痘病毒奠定基础。