目的 :NKT细胞是一类固有免疫样T淋巴细胞,其中I型NKT细胞,即i NKT细胞主要识别CD1d分子提呈的脂类抗原。本实验室通过建立昆虫表达系统以及肿瘤细胞表达系统获得了两种分子量不同的h CD1d-Fc融合蛋白,我们推测两种不同分子量的h CD1d-Fc融合蛋白发生了不同程度的糖基化。方法 :利用糖苷酶处理后,观察两种融合蛋白分子量的变化。结果 :利用N-糖苷酶去糖基化之后,两种h CD1d-Fc融合蛋白的分子量均减小。昆虫表达系统SF9细胞表达的h CD1d-Fc融合蛋白约82KD大小,经N-糖苷酶处理后,western blot检测其分子量约在71KD左右的位置,人源性肿瘤表达系统PC-3细胞表达的h CD1d-Fc融合蛋白出现两条带,分子量分别为110KD和90KD左右,经N-糖苷酶处理后,90KD大小的条带的分子量减小为71KD左右,110KD大小的条带的分子量减少至95KD左右,我们推测110KD大小的融合蛋白不仅发生了N糖基化可能还发生了O糖基化,后续试验将采用O-糖苷酶对PC-3细胞表达的融合蛋白进行酶切,并检测其分子量的变化情况。结论 :不同宿主细胞表达的h CD1d-Fc融合蛋白的糖基化程度不同,本实验中的PC-3细胞分泌产生的融合蛋白糖基化程度高于SF9细胞。