【摘 要】
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目的：建立NSCLC患者外周血循环肿瘤细胞(CTC)的EGFR突变基因检测技术,以使NSCLC患者获得实时EGFR突变情况,在EGFR-TKI治疗中获益.
方法：首先将H1975细胞株混入抽取的健康人
【机 构】
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中国医学科学院北京协和医学院北京协和医院呼吸内科100730北京中国医学科学院基础医学研究所北京协和医学院基础学院100005北京北京莱尔生物医药科技有限公司100005北京
【出 处】
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中国抗癌学会肺癌专业委员会第十二届全国肺癌学术大会
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目的：建立NSCLC患者外周血循环肿瘤细胞(CTC)的EGFR突变基因检测技术,以使NSCLC患者获得实时EGFR突变情况,在EGFR-TKI治疗中获益.
方法：首先将H1975细胞株混入抽取的健康人静脉血标本内,模拟NSCLC患者外周血.使用免疫磁珠阴性法富集CTC、免疫荧光染色的方法识别CTC.采用激光显微切割(LCM)的技术进行单个肿瘤细胞分离.继之对比研究肿瘤单细胞和多细胞PCR的扩增阳性率、单细胞DNA和全基因组预扩增(WGA)DNA于巢式PCR后的阳性扩增结果.对后者产物使用测序的方法进行了EGFR基因突变检测.
结果：通过免疫磁珠阴性富集和免疫荧光染色,检测到模拟的NSCLC患者外周血中的H1975细胞,回收率达到77.2±9.5％.论证了LCM对本实验的适用性和意义.肿瘤单细胞PCR的阳性扩增率为60％,与多细胞PCR结果相似.故确定了后继实验采用单细胞方法.单细胞DNA使用WGA预扩增及巢式PCR可完成多种目的基因的测定,重复性更好,也避免了非特异性扩增,因此,具有一定的优势.通过测序显示收集到的单细胞具有L858R和T790M突变基因,与H1975细胞株突变一致,因此,本试验达到了研究的目的.
结论：本实验建立了模拟NSCLC患者外周血CTC的EGFR基因突变检测方法.并应用本方法已从NSCLC患者CTC中检测到EGFR突变.证明使用肿瘤单细胞PCR检测可取得满意结果,且可以达到重复性检测的目的.显示WGA及巢式PCR用于单个肿瘤细胞的多个目的基因片段的扩增具有明显的优势.本方法也将可以应用于其他实体瘤的多基因位点的检测,因此对于肿瘤学的研究可能提供了新的研究途径.
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