肝素作为临床上重要的抗凝血药物,从1916年发现至今已有百年历史,但对其研究还是存在很多问题。肝素是糖醛酸(包括?-L-艾杜糖醛酸(Ido A)or?-D-葡萄糖醛酸(GlcA))和氨基葡萄糖以1,4糖苷键交替连接。糖醛酸的2位可以被硫酸基取代。氨基葡萄糖的N,3和6为也可以被硫酸基取代。氨基葡萄糖的N位还可以乙酰化。肝素作为多糖类药物同样存在相对不均一的问题。以USP肝素为原料通过superdex 75柱对其进行进一步的分离纯化,收集出峰,主峰和峰末的组分,分子量依次为18000,16500和15000道尔顿。对不同分子量肝素利用肝素酶完全酶解后进行二糖组成测定。结果表明不同分子量的肝素在二糖组成上没有明显差异。Tri S是肝素二糖的主要组成部分。三种分子量肝素Tri S的含量依次为70%,68%和65%,随着分子量的升高,Tri S的含量略有降低。肝素完全酶解后会产生还原端的氨基葡萄糖3-O为被硫酸化3-O-S四糖。3-O-S四糖来源于肝素最小活性单位-肝素五糖。分析结果表明,肝素中主要存在ΔUA+Glc NAc6S+Glc UA+Glc NS3S,ΔUA+Glc NAc6S+Glc UA+Glc NS3S6S,ΔUA+Glc NS6S+Glc UA+Glc NS3S6S,ΔUA2S+Glc NAc6S+Glc UA+Glc NS3S6S和ΔUA2S+Glc NS6S+Glc UA+Glc NS3S6S。三种分子量肝素3-O-S四糖的含量依次位5.6%,6.4%和7.9%。通过SPR测定不同分子量肝素与AT III的结合活力表明,随着分子量的增加,肝素的抗凝血活性也随着提高,高分子量和中分子量的肝素均要由于未进一步纯化的USP肝素。