过表达GATA-4骨髓间充质干细胞通过外排体修复心肌损伤的机制

来源 :第19届中国南方国际心血管病学术会议 | 被引量 : 0次 | 上传用户:haoxuexi0825
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通过慢病毒载体GV308携带GATA-4转染小鼠骨髓间充质干细胞构建过表达GATA-4小鼠骨髓间充质干细胞并加入基因开启剂DOX(强力霉素)后采用SBI公司的ExoQuick-TC提取分泌的exosome.而后将GATA-4-BMSCs-Exosome与BMSCs共同培养,空载体-BMSCs-Exosome与BMSCs共同培养,BMSCs-Exosome与BMSCs共同培养、BMSCs单独培养及小鼠心肌细胞单独培养48小时,采用Q-PCR定量检测cTnT、α-actin、connexin43、Desmin心肌特异性抗原表达量.再将过表达GATA-4BMSCs分泌的exosome与心肌细胞共培养,空载体-BMSCs分泌的exosome与心肌细胞共培养,BMSCs分泌的exosome与心肌细胞共培养及心肌细胞单独用于低氧培养无血清培养诱导细胞凋亡作为阳性对照培养48小时诱导细胞凋亡.采用流式细胞技术检测各组细胞的凋亡率.进一步采用TMT标记定量蛋白质组学分析过表达GATA-4小鼠骨髓间充质干细胞分泌exosome内有关细胞分化及抗凋亡的蛋白.探讨过表达GATA-4小鼠骨髓间充质干细胞(BMSC)通过分泌外排体(exosome)修复心肌损伤机制研究.
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