日本血吸虫精氨酸酶的克隆表达及酶活性分析

来源 :中国畜牧兽医学会家畜寄生虫学分会第七次代表大会暨第十二次学术研讨会 | 被引量 : 0次 | 上传用户:lhww123
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本课题组在前期日本血吸虫体被表膜蛋白研究中鉴定到精氨酸酶,为进一步阐明日本血吸虫精氨酸酶(SjARG)的特性和生物学功能,应用PCR克隆了SjARG基因,构建了重组表达质粒pET-28a-SjARG,在大肠杆菌BL21(DE3)中成功表达并纯化到可溶性重组蛋白rSjARG,分子量约为43kDa.Western-blotting分析显示重组蛋白具有良好的抗原性.实时定量PCR分析显示SjARG在尾蚴时期高表达,基因转录拷贝数约为其它时期的20-100倍,在42d成虫中雌虫的基因转录水平显著高于雄虫.免疫组化实验结果表明SjARG在各期虫体的表膜、实质部分均有分布,在42d成虫雌雄虫生殖器官部位表达较集中.利用纯化的rSjARG重组蛋白建立了体外酶活性分析体系,酶活性分析结果表明重组蛋白rSjARG酶活性为502.67 U/mg,最适pH为10.2,最适温度为37℃,Km值为0.0827 mol/L.Mn2+能显著提高rSjARG的活性.精氨酸酶特异性抑制剂nor-NOHA和NOHA对SjARG均有抑制作用,但两者的抑制效果和底物精氨酸的浓度有关.
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