【摘 要】
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目的 研究磷酸肌醇对瞬态感受器电位阳离子通道子类Ⅴ成员1(TRPV1)通道活性的影响.方法 通过免疫沉淀的方法将TRPV1通道蛋白从稳定表达TRPV1通道的人胚肾HEK293细胞中分
【机 构】
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苏州大学医学部药学院,江苏苏州215123
【出 处】
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第十六届全国神经精神药理学学术会议
论文部分内容阅读
目的 研究磷酸肌醇对瞬态感受器电位阳离子通道子类Ⅴ成员1(TRPV1)通道活性的影响.方法 通过免疫沉淀的方法将TRPV1通道蛋白从稳定表达TRPV1通道的人胚肾HEK293细胞中分离提取,然后重组在中性的人工脂双层膜[由1-palmitoyl-2-oleoyl-glycero-3-phospho-coline (POPC)和1-palmitoyl-2-oleoyl-glycero-3-phospho-ethanolaminein (POPE) (3∶1,V/V)组成]上来考察磷酸肌醇对TRPV1通道活性的直接影响.结果 在没有外加刺激比如辣椒素或是加热的情况下,重组于人工脂双层膜上的TRPV1通道几乎没有开放,而单独的辣椒素或是加热的刺激(不另加磷酸肌醇)也几乎不能激活通道.然而,当溶液中含有磷脂酰肌醇-4,5-二磷酸盐[PI(4,5) P2]2.5 μmol· L-1时,辣椒素显著激活TRPV1通道,增加PI(4,5) P2的浓度可以进一步增加辣椒素引起的通道开放,说明PI(4,5) P2正向调节通道活性.另外,和细胞体系中记录到的TRPV1单通道特性一样,重组在人工膜上的TRPV1通道也表现出较高的外向电导和开放几率.在2.5 μmol·L-1 PI(4,5) P2和2 μmol·L-1辣椒素的刺激下,TRPV1通道的平均外向电导为(98.4±1.8) pS而内向电导为(48.4±2.4) pS.同时,在对磷酸肌醇对TRPV1通道热激活特性的影响的研究中,我们发现不同的磷脂对TRPV1通道的热激活有不同的影响,在42℃时,PI(4,5)P2几乎使通道完全开放,然而PI(4)P只能引起非常低的开放几率,有趣的是,带负电的脂质POPG也能使通道完全开放,但是开放电导只有正常电导的1/3.结论 磷酸肌醇对TRPV1通道的活性调控是正向的.
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