【摘 要】
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目的 克隆、表达刚地弓形虫(Toxoplasma gondii)丝裂原活化蛋白激酶1(TgMAPK1)基因片段,并分析其抗原性.方法 提取弓形虫GT1株速殖子总RNA,逆转录合成cDNA.RT-PCR扩增TgM
【机 构】
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吉林农业大学动物科技学院,长春 130118
【出 处】
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中国畜牧兽医学会兽医寄生虫学分会第十三次学术研讨会
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目的 克隆、表达刚地弓形虫(Toxoplasma gondii)丝裂原活化蛋白激酶1(TgMAPK1)基因片段,并分析其抗原性.方法 提取弓形虫GT1株速殖子总RNA,逆转录合成cDNA.RT-PCR扩增TgMAPK1基因.扩增产物经双酶切后连接入pET28a(+)载体,重组质粒转化大肠埃希菌(Escherichia coli)DH5α,阳性菌落经PCR和双酶切鉴定,并测序.将测序正确的重组质粒pET28a(+)-TgMAPK1转化至E.coli BL21并加入异丙基-β-D-硫代半乳糖苷(IPTG)诱导表达,十二烷基硫酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)结合考马斯亮蓝染色检测表达产物.以鼠抗弓形虫血清为一抗,蛋白质印迹(Western blotting)分析重组蛋白的抗原性.结果 RT-PCR扩增产物约为1599 bp.菌落PCR、双酶切和测序结果显示,重组质粒pET28a(+)-TgMAPK1构建成功.SDS-PAGE结果显示,经IPTG诱导获得相对分子质量约58 Ku的包涵体重组蛋白.Western blotting分析证实其能被鼠抗弓形虫血清识别.结论 刚地弓形虫GT1株TgMAPK1基因片段可在原核表达系统中表达,且该重组蛋白具有抗原性.
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