高抗菌活性乳酸菌的筛选及菌种鉴定

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引言乳酸菌是一种广泛分布于自然界而且普遍应用于饲料领域的益生菌。细菌素可以防止饲料本身被致病菌污染,从而降低致病菌对动物的危害;乳酸菌产生的细菌素因其易被消化道中的蛋白酶降解,不易在体内蓄积引起不良反应等特性,已经引起开发高效、安全饲料添加剂科研人员的密切关注。本实验筛选到一株抑菌活性较强的乳酸菌,旨在为这一菌株作为饲料青贮添加剂的开发应用提供理论依据。材料与方法以藤黄微球菌,沙门氏菌为指示菌,通过牛津杯双层平板法对从玉米,水稻,蔬菜残渣,猪粪,鸡粪等样品中分离出的121株乳酸菌进行抑菌试验。随后通过酸排除(发酵上清液PH调至5.0),过氧化氢排除(过氧化氢酶处理),蛋白酶检测等实验对产细菌素菌株进行筛选,并对筛选到菌株的细菌素特性进行初步鉴定;最后通过生理生化试验,碳源发酵试验和16SrDNA序列分析及recA基因扩增对筛选到的菌株进行鉴定。结果实验筛选到一株编号为ZZU575的乳酸菌,在排除酸及过氧化氢的作用后其发酵上清液对藤黄微球菌及沙门氏菌仍有很强的抑菌活性,但加入蛋白酶K后抑菌活性消失,说明菌株ZZU575发酵上清液中存在细菌素类抑菌物质。且这种物质在60℃和80℃条件下热处理30min和60min后,抑菌活性基本保持不变。在PH2.0~6.0范围内,菌株ZZU575的发酵上清液对两种指示菌均有抑制作用。根据生理生化特性及16S rDNA序列等特征,ZZU575被鉴定为植物乳杆菌。讨论决定细菌素应用价值的关键因素是细菌素的稳定性,本实验筛选的菌株ZZU575的抑菌物质表现出良好的热稳定性,菌株ZZU575产生的抑菌物质在酸性条件下活性较强,表明其抑菌物质可以在弱酸性的青贮饲料中发挥作用。
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