【摘 要】
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引言 利用真核表达载体与哺乳动物细胞系表达鹅细小病毒(Goose parvovirus,GPV)结构蛋白VP2,形成病毒样颗粒(Virus-like particles,VLPs),探究其在鹅外周血淋巴细胞(Peripheeral blood lymphocyte,PBLs)中引起的细胞免疫应答.材料与方法 GPV由四川农业大学预防兽医研究所提供；GPV多抗血清由本研究中心制备；鼠源His标签抗体
【机 构】
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四川农业大学预防兽医研究所,四川农业大学动物医学院禽病防治研究中心,动物疫病与人类健康四川省重点实验室,四川成都,611130
【出 处】
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2015中国第三届水禽疫病防控研讨会
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引言 利用真核表达载体与哺乳动物细胞系表达鹅细小病毒(Goose parvovirus,GPV)结构蛋白VP2,形成病毒样颗粒(Virus-like particles,VLPs),探究其在鹅外周血淋巴细胞(Peripheeral blood lymphocyte,PBLs)中引起的细胞免疫应答.材料与方法 GPV由四川农业大学预防兽医研究所提供；GPV多抗血清由本研究中心制备；鼠源His标签抗体购自美国Protein公司,HRP标记羊抗鼠IgG购自美国EARTH公司；鹅外周血淋巴细胞分离液购自中国天津灏洋有限公司.采用一步法克隆构建表达质粒pcDNA3.1-VP2并转染293T细胞,将细胞裂解物经SDS-PAGE、western blot和间接免疫荧光染色法验证pcDNA3.1-VP2在HEK293T细胞中的成功表达.将收集的细胞裂解产物经超速离心纯化,以PBS重悬并定量,以VP2-VLPs处理鹅PBLs细胞,6h后检测CD4、CD8α、IL-6、IL-1β、IFN-α、IFNγ及IFNλ的表达量,同时以PBS组作对照.结果与讨论 成功构建出真核表达质粒pcDNA3.1-VP2,在HEK293T细胞中表达的蛋白分子量大小约为70kDa.刺激鹅外周血淋巴细胞后,与对照组相比,CD4和CD8α基因的表达量无明显变化,IL-1β和IFN-α显著升高,且IL-6、IFN-γ、IFNλ基因表达量均上调.GPV的衣壳蛋白VP2刺激鹅外周血淋巴细胞能诱导细胞免疫增强,该结果为GPV-VP2病毒样颗粒疫苗的研制提供了一定的理论依据.
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目的 对15个弓形虫虫株的弓形虫胚层发育相关蛋白(TgERP)基因进行克隆和序列分析,了解其变异和进化情况,为评价该蛋白在血清学诊断和疫苗防疫应用上的价值提供理论基础.方法 设计TgERP基因的PCR引物,对15个弓形虫虫株进行PCR扩增和序列测定,测序结果利用Puzzle 5.2、Paup 4.0和DNAStar 5.0软件进行分析.结果 TgERP基因包含的完整开放阅读框(ORF)长度均为31
弓形虫(Toxoplasma gondii)是机会致病性原虫,其病原速殖子和缓殖子之间可发生相互转化,本研究利用弓形虫PRU株感染小鼠,构建了弓形虫病慢性感染小鼠模型；模拟运输应激,人工诱发弓形虫慢性感染小鼠脑组织包囊的再活化；证实IFN-γ能在体外抑制缓殖子向速殖子的转化,在运输应激条件下通过干扰素诱导剂Polyl：C,在体内验证了IFN-γ对缓殖子向速殖子转化的抑制作用。证明了IFN-γ在宿主
弓形虫的Ⅱ型脂肪酸合成(FAS Ⅱ)对其胞内增殖具有不可或缺的作用,虫体FAS Ⅱ从头合成的饱和脂肪酸参与形成多种重要脂类物质.苹婆酸是一种存在于梧桐科植物种子中的具有环丙烯结构的不饱和脂肪酸,具有抑制Δ9去饱和酶的功能.疟原虫能够表达Δ9去饱和酶并在其红内期发挥作用,苹婆酸甲酯化物作用于红内期虫体时会使其生长延迟甚至死亡,但未见报道弓形虫能否合成不饱和脂肪酸.我们前期研究发现弓形虫能够自身合成不
引言 自2010年以来,鸭坦布苏病毒(Duck Tembusu virus,DTMBV)已经造成我国上亿只蛋鸭和上万只肉鸭发病,经济损失达数十亿元[1-3].为了有效控制DTMBV对养鸭场造成的危害,研究一种安全有效的疫苗至关重要.本研究利用基因重组手段,将DTMBV的囊膜蛋白基因PrM和E基因重组入vero细胞,以期得到能表达DTMBV囊膜蛋白的稳定细胞系,为DTMBV的病毒样颗粒(virus
引言 鸭坦布苏病毒(Duck Tembusu virus,DTMBV)属于黄病毒科(Flaviviridae)病毒,基因组为单股正链RNA,长约11kb,由2个非编码区(untranslated regions,UTRs)和1个编码区(open reading frame,ORF)组成[1].ORF编码3个结构蛋白和7个非结构蛋白(nonstructural protein,NS),分别是衣壳蛋白
引言 坦布苏病毒可自然感染多种鸟类,包括鸡、鸭、鹅、鸽子、麻雀等,为水禽养殖业带来了巨大的危害.本实验初步探究一株人工感染鸭源坦布苏病毒(GenBank：KM233707)诱导四川白鹅的抗病毒细胞免疫应答,为该病毒与水禽免疫系统互作机制提供一定的科学参考.材料与方法采取皮下注射500μl单位为6.3×106 TCID50/ml的坦布苏病毒尿囊液,人工感染一组3日龄的四川白鹅,对照组皮下注射等量的0
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引言 疱疹病毒感染宿主细胞的过程主要包括吸附、侵入、融合、组装等,进而完成病毒感染过程.大多数疱疹病毒gC与细胞表面HS结合而介导病毒的吸附,且病毒吸附是病毒感染的首要步骤,则阻断或减弱病毒的吸附可在一定程度上控制疱疹病毒的感染[1,2].本实验研究鸭瘟病毒gC与病毒吸附的关系,以及是否是通过与细胞表面HS结合而介导吸附的.
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