【摘 要】
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目的：探讨TNF-α和Beclin1与UC的关系以及健脾益肠散治疗UC大鼠的作用机理,为其临床推广应用提供科学依据.方法：将60只大鼠按随机数字表法选取10只为正常组,其余均采用2、4、6-三硝基苯磺酸(TNBS)/乙醇法建立UC大鼠模型.将造模后的大鼠又随机分为模型组、柳氮磺吡啶组和健脾益肠散高、中、低剂量组,每组10只.连续灌胃21天,记录各组大鼠饮食、体质量、大便性状及精神状态等进行DAI评
【机 构】
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贵州医科大学,贵州 贵阳550004 贵阳市第一人民医院,贵州贵阳5500022
【出 处】
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中华中医药学会脾胃病分会第二十八届全国脾胃病学术交流会
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目的：探讨TNF-α和Beclin1与UC的关系以及健脾益肠散治疗UC大鼠的作用机理,为其临床推广应用提供科学依据.方法：将60只大鼠按随机数字表法选取10只为正常组,其余均采用2、4、6-三硝基苯磺酸(TNBS)/乙醇法建立UC大鼠模型.将造模后的大鼠又随机分为模型组、柳氮磺吡啶组和健脾益肠散高、中、低剂量组,每组10只.连续灌胃21天,记录各组大鼠饮食、体质量、大便性状及精神状态等进行DAI评分；观察病变处结肠组织病理学改变；并采用ELISA法测定各组大鼠血清中TNF-α的含量、免疫组化法和Western blot法检测结肠黏膜组织中Beclin1的表达.结果：(1)正常组大鼠进食量逐渐增加,体质量加重,活泼好动,皮毛光亮,大便正常,呈卵圆形褐色颗粒状；模型组大鼠在造模后立即出现精神萎靡,喜拱背、扎堆,进食及饮水明显减少,体质量减轻,皮毛暗淡无光杂乱污秽,肛周可见脓血样稀便附着,个别见阴囊下垂,都有不同程度的黏液脓血便、腹泻、便不成形等,2周后上述症状逐渐好转,但至实验结束时仍有腹泻、便不成形情况.健脾益肠散高剂量与中剂量组及柳氮磺毗啶组造模后亦出现上述症状,但经予相应药物治疗后约1周左右,即有不同程度的缓解,进食及进水均有所增多,体质量增长,腹泻及脓血便逐渐减少；约2周后黏液脓血便等现象显著减少,大便恢复成颗粒状.(2)模型组的DAI评分明显较正常组升高,差异有统计学意义(P＜0.01)；健脾益肠散高、中剂量组及柳氮磺吡啶组的DAI评分与模型组相比均显著降低(P＜0.01)；健脾益肠散高剂量组与柳氮磺吡啶组的DAI评分差异不显著(P＞0.05),但明显较健脾益肠散中、低剂量组的DAI评分低(P＜0.05或P＜0.01).(3)正常组大鼠组织病理学显示,结肠粘膜上皮完整,各层组织结构清晰,腺体排列整齐,粘膜层、粘膜下层未见炎症细胞浸润,未见充血、水肿及溃疡的发生.模型组大鼠各层组织结构破坏,细胞间隙增宽,溃疡灶形成,个别深达固有层,可见中性粒细胞广泛浸润,并伴有杯状细胞丢失.健脾益肠散高、中剂量组结肠粘膜上皮基本完整,各层结构较清晰,可见散在中性粒细胞浸润,而炎症细胞浸润明显减轻.柳氮磺吡啶组各层结构基本清晰,散在少量中性粒细胞和炎症细胞浸润.(4)模型组大鼠血清TNF-α水平显著高于正常组,差异有统计学意义(P＜0.01)；健脾益肠散高剂量组和柳氮磺吡啶组的血清TNF-α水平与模型组比较均明显降低(P＜0.05)；健脾益肠散高剂量组与中剂量组、柳氮磺吡啶组差异不显著(P＞0.05),但较低剂量组明显降低(P＜ 0.05).(5)免疫组化检测法：Beclin 1阳性表达可见于结肠黏膜下层及肌层.各组大鼠结肠组织Beclin 1阳性表达平均OD值统计结果显示,模型组大鼠结肠Beclin 1蛋白表达较正常组明显增加(P＜0.05)；健脾益肠散高、中、低剂量组及柳氮磺吡啶组Beclin 1蛋白表达均较模型组增加,差异有统计学意义(P＜0.05或P＜0.01)；健脾益肠散高剂量组与柳氮磺吡啶组比较差异不显著(P＞0.05).Western blot检测法：正常组有低水平Beclin 1蛋白表达,各实验组大鼠结肠组织提取的蛋白在相对分子量约41KD处出现阳性条带,模型组Beclin 1蛋白表达增高,与正常组比较差异有统计学意义(P＜0.05).健脾益肠散高、中、低剂量组及柳氮磺吡啶组Beclin 1表达均较模型组增高(P＜0.05或P＜0.01).结论：(1)健脾益肠散可以缓解UC大鼠的一般情况,减轻粘膜损伤情况,降低DAI评分,高剂量组明显优于中、低剂量组,与柳氮磺吡啶组效果相仿.(2)造模成功后的UC大鼠其血清中TNF-α和结肠黏膜组织中Beclin1的含量均有所升高,经药物干预治疗,临床症状得到缓解后TNF-α含量减少,而Beclin1的表达进一步上调.(3)健脾益肠散治疗UC的作用机制可能与降低外周血中的TNF-α水平及上调结肠黏膜组织Beclin1的表达,从而抑制炎症反应、促进结肠黏膜组织修复有关.
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