【摘 要】
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通过制备可模拟玉米赤霉烯酮抗原表位的单链DNA适配子,建立了针对玉米赤霉烯酮的低毒化检测方法.基于本实验室研制的抗玉米赤霉烯酮单克隆抗体,与随机寡核苷酸文库进行反应,通过15轮富集筛选、克隆、测序,共获得63个单链DNA序列.通过对序列结构、自由能、亲和力等的分析,最终选择46号适配子为最佳适配子.基于该适配子,建立了直接竞争酶联寡核苷酸免疫方法,并获得标准曲线(y=-0.0778x+ 0.713
【机 构】
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上海交通大学农业与生物学院上海市兽医生物技术重点实验室,上海200240 美国塔夫茨大学传染病系
【出 处】
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上海市畜牧兽医学会2015年学术年会
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通过制备可模拟玉米赤霉烯酮抗原表位的单链DNA适配子,建立了针对玉米赤霉烯酮的低毒化检测方法.基于本实验室研制的抗玉米赤霉烯酮单克隆抗体,与随机寡核苷酸文库进行反应,通过15轮富集筛选、克隆、测序,共获得63个单链DNA序列.通过对序列结构、自由能、亲和力等的分析,最终选择46号适配子为最佳适配子.基于该适配子,建立了直接竞争酶联寡核苷酸免疫方法,并获得标准曲线(y=-0.0778x+ 0.713,R2=0.9981).该方法检测限为0.01 ng/ml,IC50为0.2 ng/ml.检测区间为0.03-2.5 ng/mL.在加标实验中,回收率为95％-105％.研究表明,适配子可模拟小分子物质,据此建立的低毒或无毒免疫学检测方法可保护检测人员和环境,在毒素、农残、药残等检测方面可发挥重要作用.
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