利用黄瓜抗、感疫病材料,建立抗疫病相关抗体组平台,筛选和鉴定黄瓜抗、感材料差异蛋白,并在黄瓜资源中进行验证,为今后的蛋白高通量检测和研究提供平台,发掘黄瓜的抗疫病相关蛋白,解析黄瓜抗疫病分子机理,为抗疫病分子育种打下基础。(1)构建黄瓜子叶和茎蛋白抗体组:选取2份对疫病高抗和2份高感的黄瓜材料,在子叶和茎接种瓜类疫霉菌(Phytophthora melonis Katsura)后3、6、12、24 h分别取样,提取蛋白,等量混合,均一化处理后分段免疫小鼠,抽取小鼠脾脏细胞,将其与骨髓瘤细胞进行融合制作单克隆抗体库。(2)筛选、鉴定黄瓜抗、感材料中的差异蛋白:将得到的单克隆抗体点制成抗体芯片,利用该芯片筛选黄瓜抗、感极端材料在瓜类疫霉菌侵染条件下的差异蛋白,并利用免疫沉淀(IP)富集–质谱测序方法对差异蛋白进行鉴定。本研究中建成的黄瓜抗体库容量达到15 000个单克隆抗体,覆盖约5 000个黄瓜蛋白。基于此抗体库制作黄瓜蛋白抗体芯片,并利用该芯片对黄瓜在接种后3、6、12、24 h分别检测黄瓜抗、感材料中的蛋白表达,筛选出抗、感黄瓜材料差异蛋白470个,其中受疫霉菌诱导上调的67个,下调的403个,并利用IP WB方法已经鉴定出11个蛋白。本研究通过建立黄瓜抗体库平台,不仅为黄瓜疫病抗性研究打下了坚实的基础,越来越多的抗疫病蛋白将被鉴定和验证,另外也为黄瓜其它性状在蛋白水平上进行研究提供了良好的平台。