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放射免疫治疗(RIT)是原发性肝癌的一种有效的治疗手段.但目前临床上所采用的载体通常都是鼠源的单克隆抗体,存在着低穿透力及强免疫源性等问题而影响疗效.采用噬菌体抗体库技术可通过原核细胞表达出完全人源化的单抗,此类单抗具有较强的穿透力且无免疫源性,有望成为RIT的理想载体.
目的:本实验在已成功制备人源抗HBsAg Fab的基础上,以131I标记人源抗HBsAg Fab经腹腔注射治疗荷人肝HBsAg+癌裸鼠移植瘤,同时与131I标记鼠源性抗HBsAg完整抗体S102比较,评价人源抗HBsAg Fab作为原发性肝癌放射免疫治疗载体的可能性.
方法:应用噬菌体抗体库技术制备人源抗HBsAg-Fab,应用自制的羊抗人免疫球蛋白片段抗体(anti-Fab)与GamaBind Plus Sepharose 交联制备的亲和层析柱纯化表达上清,获得高纯度的该人源单抗片段,经流式细胞仪检测证实纯化产物保持较好的生物活性.采用能够在细胞膜和细胞质特异表达HBsAg的人肝癌细胞系HepG2.2.15作传代培养,建立荷人HBsAg+的肝癌裸鼠模型.用Iodogen法131I分别标记所制备的人源抗HBsAg Fab,鼠源抗HBsAg抗体S102及无关抗体Fab,采用腹腔注射不同放射剂量的各标记单抗,按一定时间间隔作组织分布和血液清除速率测定,继续观察4周,计算各组肿瘤生长抑制率评价疗效,并以外周血白细胞和血小板数量变化评价毒性.
结果:纯化后的人源抗HBsAg-Fab经流式细胞仪检测,人源抗HBsAg-Fab组在荧光波长范围内有荧光染色细胞的吸收峰,阳性细胞数为68%,而阴性对照无吸收峰.说明所制备的人源抗HBsAg-Fab具有较好的结合细胞表面HBsAg的活性.131I标记人源抗HBsAg-Fab的细胞结合率为61%,而131I-S102的细胞结合率为69%.131I标记人源抗HBsAg-Fab注射后24h肿瘤摄入核素即达高峰,131I-人源抗HBsAg Fab被肿瘤区的摄取和血液中清除速率均明显快于131I-S102,131I-人源抗HBsAg Fab注射后24h肿瘤摄入核素即达高峰,每克瘤组织对标记抗体的摄取占注入剂量的12.13%,131I-S102在注射后72h摄取量达高峰,为9.21%ID/g.在同等剂量下131I-人源抗HBsAg Fab的抗肿瘤疗效略低,约与1/2剂量的131I-S102相当,但131I标记人源抗HBsAg-Fab组引起的血细胞下降程度明显较轻,约与1/8剂量的131I-S102组相当,血小板的变化情况与血WBC相似.
讨论:本研究采用噬菌体抗体库技术制备的人源抗HBsAg Fab为完全人源化的单抗,且具有良好免疫活性,131I标记的该抗体能被肿瘤组织快速摄取在体内正常组织中快速清除,这与该单抗仅为Fab片段,分子量较小,渗透力有关,研究结果显示131I标记的该抗体具有良好的抗肿瘤活性,且毒副作用小,是原发性肝癌放射免疫治疗的理想载体.