【摘 要】
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背景:传染性支气管炎(Infectious bronchitis,IB)是传染性支气管炎病毒(Infectious bronchitis virus,IBV)引起的一种禽的高度接触性、急性呼吸道疾病。主要临床症状是咳嗽、气管啰音、打喷嚏和肾脏病变等,导致产蛋量减少以及蛋品质下降。尽管疫苗已经广泛的用于养鸡业,但是IB的爆发仍然存在。而且,由于不断出现新的血清型,使IB的诊断变得很复杂,与其他上呼吸
【机 构】
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第十三届全国免疫学学术大会摘要汇编
【出 处】
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第十三届全国免疫学学术大会摘要汇编
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背景:传染性支气管炎(Infectious bronchitis,IB)是传染性支气管炎病毒(Infectious bronchitis virus,IBV)引起的一种禽的高度接触性、急性呼吸道疾病。主要临床症状是咳嗽、气管啰音、打喷嚏和肾脏病变等,导致产蛋量减少以及蛋品质下降。尽管疫苗已经广泛的用于养鸡业,但是IB的爆发仍然存在。而且,由于不断出现新的血清型,使IB的诊断变得很复杂,与其他上呼吸道疾病的区分也存在困难。该病至今在全球范围基本上所有的养鸡国家都存在而且呈地方流行,是国际兽医局(OIE)以及我国认定的家禽二类传染病。IBV的核蛋白作为一种主要结构蛋白,具有高度保守性,不同血清型间同源性高达94%~99%。并且有高度免疫原性,能诱导产生抗体。所以,核蛋白是IBV群特异性血清学检测诊断抗原的最佳选择,对于实验室建立快速诊断方法具有重要意义。目的 :用纯化的IBV-N蛋白作为包被抗原,建立一种检测血清中IBV抗体的间接ELISA方法。方法 :利用表达鸡传染性支气管炎病毒H120毒株N蛋白的基因工程重组菌,表达IBV-N蛋白,并利用表达载体上带有组氨酸标记的特点,用GST柱纯化重组N蛋白,加入PreScission Protease切除GST标签,Western-blot检测N蛋白的抗原性,结果显示N蛋白有较好的抗原性。通过棋盘法确定抗原的最佳浓度和血清的最佳稀释倍数。应用统计学的方法确定了阴阳性临界值。结果 :确定了抗原最佳包被浓度为0.62μg/ml;被检血清的最佳稀释度为1∶16000;酶标二抗的工作浓度为1:5000。确定了血清样品阴、阳性临界OD值为0.14。结论 :用纯化的IBV-N蛋白作为包被抗原,成功地建立了一种检测血清中IBV抗体的间接ELISA方法。
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