【摘 要】
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采用PCR扩增连接的方法将LacZ基因、口蹄疫病毒结构蛋白基因P1-2A基因按正确的读码框依次连接克隆入pMD-18T载体.将切取的LacZ基因插入伪狂犬病毒gI-/gE-质粒pIESneo载体中以替换neo,构建转移载体pIESZ.然后,将FMDV衣壳蛋白基因P1-2A插入转移载体pIESZ BamH Ⅰ位点,构建携带FMDV免疫原基因的重组伪狂犬病毒转移载体pIESZ-P1.重组转移载体经测序
【机 构】
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广东省农业科学院兽医研究所,广东,广州,510640;吉林大学农学部动物医学院,吉林,长春,130062
【出 处】
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中国微生物学会兽医微生物学专业委员会2006年学术年会
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采用PCR扩增连接的方法将LacZ基因、口蹄疫病毒结构蛋白基因P1-2A基因按正确的读码框依次连接克隆入pMD-18T载体.将切取的LacZ基因插入伪狂犬病毒gI-/gE-质粒pIESneo载体中以替换neo,构建转移载体pIESZ.然后,将FMDV衣壳蛋白基因P1-2A插入转移载体pIESZ BamH Ⅰ位点,构建携带FMDV免疫原基因的重组伪狂犬病毒转移载体pIESZ-P1.重组转移载体经测序鉴定,含有完整的目的基因表达盒.构建的转移载体质粒为与伪狂犬病毒(PRV)进行细胞内同源重组产生FMDV与PRV的重组病毒打下了基础.
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为拯救出一株能够在动物传代细胞中高水平复制的H3N2亚型猪流感疫苗株,本研究利用反向遗传操作技术,将A/Goose/Dalian/3/01(H9N2)毒株的PB1、PA、NP、M、NS基因和A/PR/8毒株的PB2基因作为内部基因与猪流感病毒A/Swine/Henan/S4/01(H3N2)毒株的HA、NA基因进行重组,成功拯救出了具有高度细胞适应性毒株rH3N2株,该毒株接毒MDCK细胞60h,
为研究猪瘟SM强毒株和HCLV株E2蛋白主要抗原结构域在分子水平和免疫水平上的差异.用PCR技术从重组质粒分别扩增了SM株和HCLV株E2基因的主要抗原结构域ABCD和C片段,分别克隆于pMAL-p2X载体中,经PCR和测序鉴定,E2基因的2个主要抗原结构域片段的位置、大小和读码框均正确.将构建的重组质粒转化到表达菌BL21-CodonPlus(DE3)-RP,对表达产物进行SDS-PAGE电泳和
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