【摘 要】
：
采用PCR扩增连接的方法将LacZ基因、口蹄疫病毒结构蛋白基因P1-2A基因按正确的读码框依次连接克隆入pMD-18T载体.将切取的LacZ基因插入伪狂犬病毒gI-/gE-质粒pIESneo载体中以替换neo,构建转移载体pIESZ.然后,将FMDV衣壳蛋白基因P1-2A插入转移载体pIESZ BamH Ⅰ位点,构建携带FMDV免疫原基因的重组伪狂犬病毒转移载体pIESZ-P1.重组转移载体经测序
【机 构】
：
广东省农业科学院兽医研究所,广东,广州,510640;吉林大学农学部动物医学院,吉林,长春,130062
【出 处】
：
中国微生物学会兽医微生物学专业委员会2006年学术年会
论文部分内容阅读
采用PCR扩增连接的方法将LacZ基因、口蹄疫病毒结构蛋白基因P1-2A基因按正确的读码框依次连接克隆入pMD-18T载体.将切取的LacZ基因插入伪狂犬病毒gI-/gE-质粒pIESneo载体中以替换neo,构建转移载体pIESZ.然后,将FMDV衣壳蛋白基因P1-2A插入转移载体pIESZ BamH Ⅰ位点,构建携带FMDV免疫原基因的重组伪狂犬病毒转移载体pIESZ-P1.重组转移载体经测序鉴定,含有完整的目的基因表达盒.构建的转移载体质粒为与伪狂犬病毒(PRV)进行细胞内同源重组产生FMDV与PRV的重组病毒打下了基础.
其他文献
根据GenBANK的核酸序列,设计8对引物从TGEV模板中分别扩增了1.9kb、1.6kb、1.5kb、2.0kb、1.1kb,1.4kb,1.4kb,1.3kb共8个片段,经测序拼接后获得8495 bp的TGEV序列.根据与其他TGEV和冠状病毒的序列和结构特征比较表明,该段序列克隆了除TGEV聚合酶基因以外的S、M、N、E、NSP3A、NSP3B、ORF7S、M、N、E、NSP3A、NSP3B
从来自全国4个省的432份样品中在犬肾传代细胞系(MDCK)成功分离并培养4株猪流感病毒.经HI试验检测为H1亚型猪流感病毒,传至4代血凝效价增高可达8log2.本试验首次在国内建立用MDCK细胞系分离猪流感病毒,为猪流感的分离建立了一个便捷,经济的新方法,同时为猪流感病毒的基础研究、诊断及分子生物学等研究奠定了基础.
猪繁殖与呼吸综合征(porcine reproductive and respiratory syndrome,PRRS)是以母猪繁殖障碍和仔猪呼吸困难为特征的、严重危害养猪业的主要传染性疾病之一,给世界范围的养猪业造成巨大经济损失.PRRS病毒(PRRSV)对宿主淋巴细胞有严格嗜性,其RNA基因组易变异,常规的疫苗设计策略难以产生理想的免疫效果,因此,探索防治该病的新方法有重要意义.RNA干扰(
为拯救出一株能够在动物传代细胞中高水平复制的H3N2亚型猪流感疫苗株,本研究利用反向遗传操作技术,将A/Goose/Dalian/3/01(H9N2)毒株的PB1、PA、NP、M、NS基因和A/PR/8毒株的PB2基因作为内部基因与猪流感病毒A/Swine/Henan/S4/01(H3N2)毒株的HA、NA基因进行重组,成功拯救出了具有高度细胞适应性毒株rH3N2株,该毒株接毒MDCK细胞60h,
为研究猪瘟SM强毒株和HCLV株E2蛋白主要抗原结构域在分子水平和免疫水平上的差异.用PCR技术从重组质粒分别扩增了SM株和HCLV株E2基因的主要抗原结构域ABCD和C片段,分别克隆于pMAL-p2X载体中,经PCR和测序鉴定,E2基因的2个主要抗原结构域片段的位置、大小和读码框均正确.将构建的重组质粒转化到表达菌BL21-CodonPlus(DE3)-RP,对表达产物进行SDS-PAGE电泳和
根据猪流感病毒M基因的序列分析结果,设计了一对扩增M基因特异性引物.采用该技术对H1、H3、H5和H9 4个亚型猪流感病毒标准参考株,RT-PCR检测的结果都呈阳性,对猪副粘病毒、圆环病毒2型、猪呼吸与繁殖综合症病毒、猪伪狂犬病毒RT-PCR扩增结果都呈阴性.RT-PCR最少可检测到1000EID50的病毒核酸.采用该对引物,直接从猪流感病毒感染小鼠的组织样品中提取核酸,RT-PCR阳性结果和鸡胚
目的:建立一种高效、简便的实时荧光定量PCR方法,用于猪圆环病毒2型定性及定量的检测.方法:利用PCR技术扩增猪圆环病毒2型ORF2保守区基因107bp片段并克隆到pMD-19-T载体上,纯化的质粒作为PCR检测的标准模板,以10倍梯度稀释质粒为标准模板,进行荧光定量PCR扩增猪圆环病毒2型基因片段并绘制标准曲线,然后以提取的PCV-2、PCV-1、PPV和PRV的DNA作为模板,采用同样体系进行
本试验建立了SYBR Green Ⅰ实时荧光定量PCR方法检测PCV-2.分析表明,10倍系列稀释的标准质粒9个点均在一条直线上,二者相关系数R2＞0.999,扩增效率达到97％.敏感性、特异性及重复性实验证明,批间、批内重复试验的变异系数均小于1.5％;可检测10-5.5TCID50.40份被检样品,SyReTi-PCR检测阳性率为87.5％,与普通PCR检测的符合率为94.6％,其敏感性是普通
根据GenBank中猪圆环病毒2型(PCV-2)ORF2基因序列设计一对引物,应用PCR从含有PCV-2的PK-15细胞中扩增出ORF2基因片段,回收PCR产物,将其克隆入pMD18-T载体,获得重组质粒pTORF2,并对其进行序列测定.重组质粒经BamHI、XnolI双酶切,回收ORF2基因,,定向克隆到表达载体pET-32a中并转化大肠杆菌Rosetta,进行原核表达.用此表达产物包被酶标板,
猪圆环病毒2型(Porcine circovirus-2,PCV-2)是导致猪断奶后多系统衰弱综合征(Postweaning muhisystemic wasting syndrome,PMMS)的重要病因,并与猪皮炎、肾病综合征(PDNS)、先天性颤抖病、间质性肺炎等有密切关系.多发生在5～12周龄的小猪,主要表现呼吸急促或困难,贫血.淋巴结病变和进行性消瘦.它常与猪呼吸与繁殖综合征病毒(PRR